【摘 要】
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背景:肝细胞癌细胞和肝内胆管癌细胞是肝脏常见的原发性肝肿瘤细胞。混合型肝癌是第三大肝脏原发性恶性肿瘤,其细胞学成分同时含有肝癌细胞和肝内胆管癌细胞,约占肝脏原发性肿瘤的1.0%-14.3%。混合型肝癌另一突出特点是转移率高而导致临床预后极差。研究表明,肿瘤分期相同情况下,与肝细胞型肝癌和胆管细胞型肝癌相比,混合型肝癌具有更高的术后转移率、复发率和更低的远期生存率。有研究认为,混合型肝癌预后差与其可
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背景:肝细胞癌细胞和肝内胆管癌细胞是肝脏常见的原发性肝肿瘤细胞。混合型肝癌是第三大肝脏原发性恶性肿瘤,其细胞学成分同时含有肝癌细胞和肝内胆管癌细胞,约占肝脏原发性肿瘤的1.0%-14.3%。混合型肝癌另一突出特点是转移率高而导致临床预后极差。研究表明,肿瘤分期相同情况下,与肝细胞型肝癌和胆管细胞型肝癌相比,混合型肝癌具有更高的术后转移率、复发率和更低的远期生存率。有研究认为,混合型肝癌预后差与其可能起源于肝前体细胞有关;同时,上皮细胞-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关信号通路在混合型肝癌中异常活化,提示高水平的EMT可能在混合型肝癌发生、发展过程中发挥重要作用。肿瘤旁细胞在肿瘤细胞EMT过程中发挥重要作用。在混合型肝癌中,肝癌细胞和肝内胆管癌细胞之间是否存在类似“肿瘤旁细胞”的相互影响关系值得进一步研究。方法:本研究通过细胞培养研究来检测肝细胞癌细胞和肝内胆管癌细胞之间的潜在相互作用,并采用CRISPR-Cas9敲除技术及相关后续细胞实验分析其内在机制。结果:克隆形成实验结果显示,肝内胆管癌培养上清中的肝癌细胞生长疏松,呈现出EMT样变化。细胞划痕愈合实验显示,相较于肝细胞癌细胞培养上清,肝内胆管癌细胞培养上清中,肝细胞癌细胞Hep G2和SNU-449细胞迁移能力增强。Transwell实验结果显示肝内胆管癌细胞培养上清中的Hep G2和SNU-449穿膜细胞的数目明显增加,侵袭能力显著增强。虽然CCK8、Edu增殖实验结果显示,肝内胆管癌细胞培养上清不能促进肝细胞癌细胞的增殖,但是增强了Hep G2和SNU-449对顺铂及阿霉素的耐药能力。WB结果显示肝内胆管癌细胞培养上清处理后,Hep G2细胞上皮标志物E-cadherin下调,Hep G2和SNU-449细胞间充质相关蛋白Vimentin和Snail表达上调。进一步研究发现:Laminin subunit gamma 2（LAMC2）在Hep G2和SNU-449及其培养上清中几乎没有表达,而在肝内胆管癌细胞系HCCC-9810和Hu CCT1细胞培养上清中则高表达。通过研究LAMC2敲除Hu CCT1细胞株培养上清对肝癌细胞的影响,证实LAMC2在这一特殊现象中发挥重要作用。结论:本实验证实肝内胆管癌细胞能过通过分泌LAMC2增强肝细胞癌细胞的迁移、侵袭及耐药能力,促进肝细胞癌细胞的EMT,可能导致混合型肝癌的不良预后。
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