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第一部分LAT、CD98hc在胃癌组织中表达与临床病理特征的关系目的:探讨L型氨基酸转运载体1(L-type amino acid transporter-1,LAT1)、CD98hc在胃癌中的表达及其与胃癌临床病理特征的关系。方法:采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法和免疫组织化学方法检测45例胃癌组织及45例癌旁正常组织中LAT1、CD98hc、Ki67表达。结果:RT-PCR检测显示胃癌组织中LAT1、CD98hc的表达显著高于癌旁正常组织(P﹤0.05);免疫组化结果显示,LAT1在胃癌组织和癌旁组织中表达率分别为64.4%和6.67%(P﹤0.01); CD98hc在胃癌组织和癌旁组织中的表达率分别为60.0%和22.2%(P﹤0.01);LAT1、CD98hc的表达在低分化组显著高于高中分化组(P﹤0.05);肿瘤大小≥5cm组显著高于<5cm组;在Ⅰ~Ⅱ期、淋巴结无转移组LAT1、CD98hc的表达明显比Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移组低(P﹤0.01); LAT1、CD98hc与Ki67的表达水平均呈正相关(P﹤0.01)。结论:胃癌组织中LAT1、CD98hc具有高表达率,且表达具有高度肿瘤特异性,提示LAT1、CD98hc可能在胃癌的生长与转移中有非常重要的作用。第二部分LAT1及CD98hc在胃癌细胞中的表达及LAT1抑制剂对细胞生物学行为的影响目的:观察LAT1与其异二聚体CD98hc在胃癌细胞SGC-7901中的表达及LAT1抑制剂BCH对细胞增殖与迁移能力的影响。方法:RT-PCR、IF与Westernblot检测胃癌细胞SGC-7901中LAT1与CD98hc mRNA与蛋白的表达。不同浓度的LAT1拮抗剂BCH作用于胃癌细胞SGC-790148h后,新型四唑氮盐(MTS)比色法检测各组细胞生长情况,流式细胞仪检测各组细胞周期分布情况,Transwell细胞迁移小室检测各组细胞迁移能力的变化。结果:LAT1及其异二聚体CD98hc在胃癌细胞SGC-7901中有表达。与空白组相比,随着BCH浓度的提高,胃癌细胞SGC-7901的增殖能力与迁移能力逐渐降低。细胞周期分析发现,BCH处理的胃癌细胞组S期细胞减少,而G0/G1期细胞增加(p<0.05)。结论:LAT1及其异二聚体CD98hc在SGC-7901细胞中的有表达,LAT1可能促进SGC-7901细胞的增殖,加快细胞周期进程,增强SGC-7901细胞的迁移能力。第三部分RNA干扰LAT1对胃腺癌SGC-7901细胞生长、侵袭与转移的影响目的:研究下调胃癌细胞SGC-7901的LAT1表达对其体外增殖、迁移、侵袭的影响。方法:设计并合成两条针对编码LAT1的SLC7A5基因的mRNA寡核苷酸干扰序列和阴性对照序列,连接pGPU6/GFP/Neo质粒载体上,分别转染至细胞株SGC-7901,RT-PCR与Western blot检测干扰后LAT1、LAT1的异二聚体CD98hc的mRNA与蛋白表达量,筛选出抑制率较高的质粒,用G418筛选出稳定表达干扰序列的胃癌细胞株。MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,Transwell小室检测细胞迁移与侵袭能力。结果:酶切电泳分析和DNA测序证实成功构建LAT1-shRNA质粒,转染48小时后,与未处理组和阴性对照组相比,LAT1-shRNA1与LAT1-shRNA2重组载体转染胃癌SGC-7901细胞后对LAT1mRNA表达及LAT1蛋白表达均有抑制作用,LAT1-shRNA2重组载体抑制效率最高,但CD98hc未见明显变化。LAT1的表达下调后,胃癌细胞SGC-7901的增殖、迁移与侵袭能力均受到一定程度的抑制(P<0.05)。流式细胞术结果表明,细胞阻滞与G0/G1期。结论:下调LAT1表达对胃癌细胞SGC-7901体外增殖、迁移与侵袭有抑制作用,LAT1在人胃癌细胞增殖、迁移与侵袭中发挥重要作用。