【摘 要】
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目的:本研究旨在运用网络药理学分析方法,挖掘二陈汤防治冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)可能的靶点和信号通路,并通过细胞实验进行验证,探讨二陈汤调控氧化应激损伤所致泡沫细胞焦亡水平的分子机制。材料与方法:1.基于网络药理学分析筛选二陈汤防治冠心病的潜在分子靶点利用TCMSP数据库筛选出二陈汤的主要化合物和其作用靶点;GenCLip3数据库检索冠心病相关蛋白;通过Venny2.1将二陈汤与冠心病相关
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目的:本研究旨在运用网络药理学分析方法,挖掘二陈汤防治冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)可能的靶点和信号通路,并通过细胞实验进行验证,探讨二陈汤调控氧化应激损伤所致泡沫细胞焦亡水平的分子机制。材料与方法:1.基于网络药理学分析筛选二陈汤防治冠心病的潜在分子靶点利用TCMSP数据库筛选出二陈汤的主要化合物和其作用靶点;GenCLip3数据库检索冠心病相关蛋白;通过Venny2.1将二陈汤与冠心病相关蛋白取交集获得交集靶蛋白;STRING数据库筛选出核心靶点,再通过KEGG数据库进行富集分析,预测二陈汤治疗冠心病的作用机制。2.基于Nrf2信号通路探讨二陈汤降低氧化应激损伤所致泡沫细胞焦亡水平的分子机制通过氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导THP-1细胞氧化应激损伤,建立泡沫细胞模型;流式细胞术检测不同浓度二陈汤含药血清作用下泡沫细胞的细胞凋亡情况,设立模型组(10%胎牛血清培养+2%ox-LDL)、低浓度用药组(5%二陈汤低浓度含药血清+10%胎牛血清+2%ox-LDL)、高浓度用药组(5%二陈汤高浓度含药血清+10%胎牛血清+2%ox-LDL)、空白血清组(5%空白血清+10%胎牛血清+2%ox-LDL),选择二陈汤含药血清的最佳作用浓度。分别应用实时定量逆转录-聚合酶链式反应法(q RT-PCR)及Western Blot法检测泡沫细胞及二陈汤含药血清作用后细胞内Nrf2、NLRP3 mRNA的水平及Nrf2、NLRP3、caspase-1和caspase-10蛋白的表达水平。结果:1.通过TCMSP数据库共得到二陈汤成分208个,预测得到二陈汤靶蛋白258个,冠心病相关蛋白946个,交集后得到37个靶蛋白。通过STRING数据库构建二陈汤与冠心病交集靶蛋白的蛋白互作网络(PPI);2.再进一步进行GO及KEGG分析,结果显示主要涉及细胞凋亡和NOD-like receptor通路等氧化应激常见通路。3.根据流式细胞术检测结果显示,与其他剂量组相比,高浓度用药组(5%二陈汤高浓度含药血清+10%胎牛血清+2%ox-LDL)细胞凋亡比率明显下降(p<0.01)。q RT-PCR法检测空白对照组(10%胎牛血清培养)、模型组(10%胎牛血清培养+2%ox-LDL)、空白血清组(5%空白血清+10%胎牛血清+2%ox-LDL)和含药血清组(5%二陈汤高浓度含药血清+10%胎牛血清+2%ox-LDL)细胞Nrf2和NLRP3 mRNA的表达;采用Western blot法检测上述4组细胞的Nrf2、NLRP3、caspase1和caspase10的蛋白表达,结果发现与空白对照组比较,模型组细胞NLRP3 mRNA及蛋白表达均显著升高(p<0.01),caspase1和caspase10蛋白表达均显著升高(p<0.01),Nrf2 mRNA及蛋白表达均显著降低(p<0.01);与模型组及空白血清组比较,含药血清组细胞NLRP3 mRNA及蛋白表达均显著降低(p<0.01),caspase1和caspase10蛋白表达均显著降低(p<0.01),Nrf2 mRNA及蛋白表达均显著升高(p<0.01)。结论:网络药理学及细胞学实验的结果表明二陈汤可通过调控Nrf2通路,有效减轻ox-LDL诱导的泡沫细胞氧化应激损伤,降低细胞焦亡水平,提示Nrf2/NLRP3可能是二陈汤治疗冠心病的分子靶点。
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