β-谷甾醇对亚急性瘤胃酸中毒湖羊瘤胃微生物区系和免疫性能的影响

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我国因缺乏优质粗饲料资源,在动物生产中大量使用富含淀粉的高谷物饲粮饲喂牛、羊等反刍动物,这样使得奶牛等反刍动物的亚急性瘤胃酸中毒(SARA)的发病率高达近30~40%。如何采用有效方法来预防或控制反刍动物瘤胃酸中毒的发生?成为生产中急需解决的问题。本研究旨在研究β-谷甾醇对湖羊瘤胃发酵及其微生物区系的影响,为其在养羊生产中应用提供理论依据。试验一、体外法研究β-谷甾醇对湖羊瘤胃埃氏巨型球菌生长的影响利用体外法纯培养埃氏巨型球菌(Meldenii),研究不同剂量β-谷甾醇对M.elsdenii生长的影响作用。通过微量稀释法测定瘤胃埃氏巨型球菌在不同浓度β-谷甾醇中的生长状况。试验结果表明,0.25~2.0 mg/mLβ-谷甾醇对瘤胃埃氏巨型球菌的生长没有抑制作用,且随着β-谷甾醇浓度的提高,瘤胃埃氏巨型球菌增殖加快。β-谷甾醇的浓度在0.25~2.0 mg/mL时对瘤胃埃氏巨型球菌的生长有促进作用,且随β-谷甾醇的浓度提高,促进效果增强。试验二、SARA状态下β-谷甾醇添加水平对湖羊瘤胃发酵和瘤胃微生物结构的影响选取装有瘤胃瘘管的健康湖羊8只,通过4×4拉丁方试验,探究SARA状态下添加β-谷甾醇对瘤胃发酵及微生物区系的影响。设置空白对照组和β-谷甾醇添加组,β-谷甾醇添加量分别为0.25 g/kg,0.5 g/kg,1.0 g/kg。体内试验分4期依次进行,每期分为预饲期14天和试验期7天,共计21天。在预饲期内各组逐步提高日粮中NFC/NDF的比例直至发生SARA,进入试验期后在每期最后一天进行样品采集。测定瘤胃液pH、VFA、NH3-N、乳酸以及采食后6h瘤胃液中的微生物区系。试验结果表明,1)采食后3h、6h,T(1.0)组与对照组相比pH显著提高(P<0.05);添加1.0 g/kg β-谷甾醇缩短了 SARA持续的时间。2)各时间点β-谷甾醇对理组TVFA摩尔浓度均无显著差异(P>0.05);采食后3h,T(0.25)、T(0.5)和T(1.0)组氨氮浓度均显著高于对照组(P=0.05)。3)采食后3~9h,与对照组相比T(0.5)和T(1.0)组的乙酸比例显著提高(P<0.05);3~12h时,T(1.0)组的丙酸比例显著低于对照组(P<0.05);3h时各试验组与对照组相比,乙丙比有降低的趋势(P=0.06)。4)采食后3~12h,T(0.5)和T(1.0)组乳酸含量显著低于对照组(P<0.05)。5)在ACE指数以及Chao 1指数两个指标中,T(1.0)组均极显著显著低于对照组(P<0.01),但是Shannon指数以及Simpson指数两个指标中,试验组与对照组相比无显著差异(P>0.05)。6)T(0.5)组拟杆菌门的相对丰度较对照组相比显著提高(P=0.05);T(0.5)组和T(1.0)组极显著降低了绵羊瘤胃液中蓝藻门的相对丰度(P<0.01)。SARA状态下添加1.0g/kg β-谷甾醇可显著提高瘤胃pH。β-谷甾醇对各处理组TVFA摩尔浓度无显著差异,但可通过提高乙酸比例和NH3-N浓度,降低丙酸比例、乙丙比和乳酸含量调控瘤胃发酵。添加0.5 g/kgβ-谷甾醇能改变瘤胃微生物的菌群结构,其可通过提高拟杆菌门的相对丰度,降低蓝藻菌门的相对丰度改变微生物区系。试验三、SARA状态下β-谷甾醇添加水平对湖羊免疫性能的影响在试验二的最后一天晨饲前通过颈静脉采集试验羊血液样本,对其血液生化指标测和血清中细胞因子含量进行测定。试验结果表明,1)各处理组球蛋白、白球比、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白以及低密度脂蛋白浓度均无显著差异(P>0.05),球蛋白有降低的趋势(P=0.09)。2)1.0 g/kgβ-谷甾醇降低了湖羊血液中总蛋白和白蛋白浓度(P<0.05),提高了碱性磷酸酶和乳酸脱氢酶浓度(P=0.05,P=0.03)。3)0.5g/kgβ-谷甾醇显著提高血清中IL-10、IL-1β浓度(P<0.05)。SARA状态下添加0.5g/kgβ-谷甾醇显著降低血清中IL-10浓度,显著提高血清中IL-1β和TLR4浓度,对SARA引起的慢性炎症反应具有一定的缓解作用。总之,添加β-谷甾醇对亚急性瘤胃酸中毒发酵有一定的调控作用,其可通过提高瘤胃pH、乙酸比例、NH3-N浓度,降低丙酸比例、乙丙比和乳酸浓度以及改变瘤胃微生物结构和降低慢性炎症反应来缓解瘤胃酸中毒的发生。
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