【摘 要】
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本研究以武汉地区分离到的日本乙脑病毒HW株(Japanese Encephalitis Virus,JEV/HW)为材料,对JEV/HW全基因组进行了分段克隆、测序、拼接,最后获得了包含10个基因的全长基因组
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本研究以武汉地区分离到的日本乙脑病毒HW株(Japanese Encephalitis Virus,JEV/HW)为材料,对JEV/HW全基因组进行了分段克隆、测序、拼接,最后获得了包含10个基因的全长基因组DNA序列,这10个基因为:C、PrM、E、NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b、NS5,在Gen Bank上注册号为AY849939。构建了包括JEV/HW在内的19株JEV的分子进化树。并将扩增到的JEV/HW的E基因及NS1基因构建了原核表达质粒,并进行了JEV/HW NS1基因的原核表达,同时构建了JEV/HW E基因和NS1基因的真核表达基因疫苗。 序列比较分析发现:HW株与其他18株全基因组JEV病毒同源性为88.7%-99.3%。HW株与KV1899株同源性最低(88.7%),与P3株同源性最高(99.3%),推测的蛋白比较分析发现,同源性在97.0%-99.4%,HW株与KV1899株同源性最低(97.0%),与P3株同源性最高(99.4%),利用计算机软件构建了包括JEV/HW在内的19株JEVW分子进化树,综合分析可以推断HW株为P3衍生株。 在序列分析的基础上,构建了两个原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了NS1蛋白。同时以pCDNA3.1为真核表达载体,构建了JEV/HW的基因疫苗pCDNA3.1-E和pCDNA3.1-NS1,两种基因疫苗经扩增纯化后可直接用于免疫动物,进行免疫源性试验,为下一步JEV/HW基因疫苗的研制打下了基础。
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