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脂质体(Lipsome)是一种药物新剂型,作为药物载体己被广泛的应用于医药领域,尤其是脂质体药物载体因为具有靶向、高效、长效、低毒、副作用小等特点引起了众多研究者的关注。大黄酚(Chrysophanol)是大黄产生药理作用的主要有效成分之一,具有较好的抗菌、止咳、止血、抗衰老、利尿、抗癌和促进肠管动物的神经兴奋和肌肉麻痹作用。本试验旨在深入研究大黄酚脂质体制备方法和影响因素的基础上对大黄酚脂质体制备工艺条件进行正交优化,并对制备的大黄酚脂质体进行质量评价和药效学实验,现将实验结果总结如下:
1、制备方法的选择:以稳定性和包封率为指标对手摇法(Handmethod)、薄膜-超声法(Film-Ultrasonic method,FU)、逆相蒸发法(REV)、熔融法(Melting method)、乙醇注入法(Ethanol injection method)、乙醚注入法(Ether injection method)、乙醇注入-超声法(Ethanol injection Ultrasonic)等制备方法进行了考察。结果表明,薄膜-超声法制备的大黄酚脂质体包封率高,溶液均一稳定。
2、影响因素考察和正交优化试验:对薄膜-超声制备方法中的多种影响因素进行考察,并根据L9(34)正交表进行了正交优化,结果表明:当膜材比1:3,药脂比3:40,成膜温度为45℃,pH=8.2,加入适量的抗氧化剂和表面活性剂,成膜容器和脂质体混合液体积比为50:1,Tris缓冲溶液作为水合介质时,即可达到最佳的制备效果。制得的大黄酚脂质体的包封率基本稳定在(86.9±4.2)％,稳定性好。
3、大黄酚脂质体的质量评价:从外观、形态、粒径、稳定性等方面对大黄酚脂质体进行了质量评价。肉眼观察大黄酚脂质体呈浅乳黄色,无杂质；透射电镜下观察到的脂质体为粒径均匀的球状或近球状小囊泡；平均粒径为420～750nm,绝大多数都小于2μm；脂质体在4℃条件下静置15d后,无分层和沉积现象,测得的渗透率为2.8％,这说明制得的大黄酚脂质体稳定性好。
4、大黄酚脂质体和游离大黄酚分离方法的筛选:采用葡聚糖G-25凝胶柱、葡聚糖G-50凝胶柱、超速离心法、低速-超速离心法、低速离心法等分离方法对大黄酚脂质体和游离大黄酚的分离进行了详细考察。结果表明,低速离心法操作简单、设备要求低、成本廉价,并满足大黄酚脂质体和游离大黄酚的分离要求。通过回收率实验发现,回收率=100.6％,RSD=0.35％。
5、大黄酚脂质体的药效学试验:过氧化脂质(LPO)是生物膜和亚细胞膜中磷脂质所含多元不饱和脂肪酸被自由基损伤后氧化而成的过氧化物,测定生物组织中的脂质过氧化产物-丙二醛(MDA),是评价延缓衰老药物的重要指标,也是检测生物组织衰老的重要标志之一。文献显示,大黄酚能明显减少离体大鼠脑、肝组织中的过氧化脂质的生成。大黄酚脂质体药效学试验是利用上述报道,分别向大鼠离体的脑、肝组织给予游离的大黄酚药物和大黄酚脂质体药物,观察两种药物对过氧化脂质的减少作用,并对结果进行比较。实验测得的数据通过SPSS统计分析软件统计分析后,结果显示,对照组与实验组的均有显著性差异(P<0.05),这说明游离的大黄酚和大黄酚脂质体均对过氧化脂质的生成有明显的抑制作用,其中,大黄酚脂质体的药效优于游离大黄酚。
目前大黄酚在临床应用上,除了口服药外没有其它安全的制剂,该实验填补了大黄酚脂质体制备的空白,同时为今后大量制备大黄酚脂质体药物提供了基础数据,也为临床中安全有效的使用大黄酚制剂打下了坚实的基础。