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肺动脉高压是由一组异源性疾病引起的以肺动脉压力和肺血管阻力持续升高为特征的病理生理综合征。病变进行性发展可致病人发生右心衰竭而死亡，是严重慢性肺循环疾病。过去的十几年里，前列环素类似物、内皮素受体拮抗剂、5-磷酸二酯酶抑制剂等的问世，改善了部分患者的症状、活动能力及生存率，但远期的生存率依然很低，肺动脉高压的治疗目前是仍然是临床上的难点。
血管紧张素—(1-7)[Ang—(1-7)]是近年新发现的肾素—血管紧张素系统(RAS)中有生物活性的七肽，它可由血管紧张素Ⅰ(AngⅠ)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在内切肽酶作用下直接或间接降解产生。最近的研究证实：AngⅠ和AngⅡ可在血管紧张素转化酶2(ACE2)作用下生成Ang—(1-7)。Ang—(1-7)主要通过G蛋白偶联受体(GRCR) Mas产生扩血管、抗血管平滑肌细胞增殖和改善内皮功能的生物学效应。长期给予以血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)，可明显增加血浆中Ang—(1-7)水平，提示Ang—(1-7)在ACEI和ARB的生物学作用中有重要地位。有研究发现，ACEI和ARB可抑制肺动脉高压的发生，抑制肺血管重构，其机制可能与上调内皮一氧化氮合酶(eNOS)的表达有关。但直接给予外源性的Ang—(1-7)是否可降低肺动脉压，抑制肺血管平滑肌细胞的增殖，目前国内外尚未见相关报道。我们通过建立野百合碱(MCT)诱导的肺动脉高压模型，经微泵泵入Ang—(1-7)4周，研究Ang—(1-7)对肺动脉压力和肺血管重构的影响，并探讨其可能机制，为肺动脉高压的治疗提供新的思路。
本课题包括以下三部分内容：
1.Ang—(1-7)对野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺动脉压和肺血管重构的影响。
2.Ang—(1-7)对野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺组织中细胞外信号调节激酶的影响。
3.Ang—(1-7)对野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺组织中Akt/eNOS信号通路的影响。
第一部分 Ang—(1-7)对野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺动脉压和肺血管重构的影响
目的：探讨Ang—(1-7)能否预防和减轻野百合碱诱导大鼠的肺动脉高压和肺血管重构的发生。
方法：大鼠随机均分为三组：对照组、MCT组、MCT+Ang—(1-7)组(n=20)。后两组皮下注射MCT60mg·kg-1后第二天，MCT+Ang—(1-7)组经微泵泵入Ang—(1-7)(24 ug·kg—1·h-1)，MCT组经微泵给予同等剂量的生理盐水，对照组皮下注射和微泵给予均为生理盐水。4周后，测定右心室收缩压(RVSP)和右心室肥厚指数(RVHI)，测定肺小动脉管壁厚度(WT)占动脉外径(ED)的百分比(WT％)及管壁面积(WA)占血管总面积的百分比(WA％)。检测血浆和肺组织中AngⅡ的浓度。
结果：
1.Ang—(1-7)对右心室收缩压(RVSP)和右心室肥厚指数(RVHI)的影响
对照组、MCT组、MCT+Ang—(1-7)组分别有20只、18只、20只动物完成了实验。MCT组的右室收缩压(RVSP)及右心室肥厚指数(RVHI)明显升高对照组(RVSP：33.06±1.79mmHg vs17.68±1.80mmHg，RVHI：38.20±3.90％ vs28.41±2.71％，P<0.01)。MCT+Ang—(1-7)组与MCT组相比右室收缩压(RVSP)及右心室肥厚指数(RVHI)都明显降低(RVSP：20.19±2.22 mmHg vs33.06±1.79mmHg，RVHI：29.32±2.61％ vs38.20±3.90％，P<0.01)。
2.肺小动脉形态学观察和Ang—(1-7)对肺血管重构的影响
对照组大鼠肺血管内皮细胞连续性较好，管壁厚薄一致：而MCT组血管中膜平滑肌细胞明显增生，管壁增厚，管腔变小。MCT+Ang—(1-7)组血管平滑肌细胞增生受抑制，管壁增厚及管腔变小受抑制。MCT组肺动脉管壁厚度占管径的百分比(WT％)和肺动脉管壁面积占血管总面积的百分比(WA％)明显高于对照组(WT％：58.06±4.72 vs34.51±2.65，WA％：74.40±3.61 vs48.28±3.76，P<0.01)，MCT+Ang—(1-7)组与MCT组相比，WT％和WA％有显著降低(WT％：40.56±3.96 vs58.06±4.72，WA％：54.68±3.96 vs74.40±3.61，P<0.01).
3.Ang—(1-7)对血浆及肺组织AngⅡ浓度的影响
对照组、MCT组、MCT+Ang—(1-7)组三组肺组织中AngⅡ浓度分别为322.8±38.7pg/ml、521.4±43.6pg/ml、492.6±33.9pg/ml，MCT组肺组织AngⅡ浓度高于对照组(P<0.01)，MCT组肺组织AngⅡ浓度与MCT+Ang—(1-7)组无明显差异(P>0.05)。对照组、MCT组、MCT+Ang—(1-7)组三组血浆AngⅡ浓度分别为1467.1±34.8 pg/ml、1507.8±41.0pg/ml、1488.9±23.8pg/ml，血浆AngⅡ浓度三组之间无明显差异(P>0.05)。
小结：
1.野百合碱60mg·kg-1一次性颈部皮下注射，4周后可成功建立大鼠肺动脉高压模型。
2.Ang—(1-7)虽未减轻肺动脉高压大鼠肺组织AngⅡ浓度，但早期干预可抑制野百合碱诱导大鼠肺动脉高压和肺血管重构的发生。
第二部分 Ang—(1-7)对野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺组织细胞外信号调节激酶的影响
目的：探讨Ang—(1-7)对野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺组织细胞外信号调节激酶[extracellular regulated protein kinases1/2，(ERK1/2)]的影响。
方法：实验动物、分组及给药方法同第一部分。四周后提取实验动物肺组织，Western免疫印迹分析肺组织中ERK1/2的表达。
结果：与对照组相比，MCT组ERK1/2磷酸化水平显著升高(P<0.01)。与MCT组相比，MCT+Ang—(1-7)组，ERK1/2磷酸化水平均明显降低(P<0.01)。
小结：野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠模型中，Ang—(1-7)通过抑制ERK1/2磷酸化水平，抑制肺血管的重构。
第三部分 Ang—(1-7)对野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺组织中Akt/eNOS信号通路的影响。
目的：探讨Ang—(1-7)对野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺组织中Akt/eNOS信号通路的影响。
方法：实验动物、分组及给药方法同第一部分。四周后提取肺组织，检测肺组织中NO的浓度，Western免疫印迹分析肺组织eNOS、P—Ser1177-eNOS的表达和蛋白激酶B(Akt)磷酸化水平。
结果：
1.Ang—(1-7)对肺组织NO浓度的影响
对照组、MCT组、MCT+Ang—(1-7)组三组肺组织中NO浓度分别为：80.2±2.3umol/L、37.4±3.4 umol/L、68.5±5.1umol/L，MCT细肺组织NO浓度均低于对照组(P＜0.01)。MCT+Ang-(1-7)组与MCT组相比NO浓度明显升高(P＜0.01)。
2.Ang-(1-7)对肺组织eNOS蛋白、P-Ser1177-eNOS表达的影响
MCT组eNOS、P-Ser1177-eNOS明显低于对照组(P＜0.01)，MCT+Ang-(1-7)组与MCT组相比eNOS、P-Ser1177-eNOS明显升高(P＜0.01)。
3.Ang-(1-7)对肺组织Akt磷酸化水平的影响
MCT组Akt磷酸化水平明显低于对照组(P＜0.01)，MCT+Ang-(1-7)与MCT组相比Akt磷酸化水平明显升高(P＜0.01)。
小结：Ang-(1-7)通过上调eNOS的表达，以及使Akt磷酸化增加这两条途径使eNOS磷酸化增加，NO生成增加。NO发挥其生物学效应使肺血管扩张，抑制血管平滑肌细胞的增生、迁移，从而抑制肺动脉高压的发生以及肺血管的重构。
全文总结
1.野百合碱60mg·kg-1一次性颈部皮下注射，4周后可成功建立大鼠肺动脉高压模型。
2.Ang-(1-7)早期干预可抑制野百合碱诱导大鼠肺动脉高压的发生和肺血管的重构。(创新点1)
3.野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠模型中，Ang-(1-7)可通过抑制ERK1/2磷酸化水平，抑制肺血管的重构。(创新点2)
4.Ang-(1-7)通过上调eNOS的表达，以及使Akt磷酸化增加这两条途径使eNOS磷酸化增加，NO生成增加。NO发挥其生物学效应使肺血管扩张，抑制肺血管平滑肌细胞的增生、迁移，从而抑制肺动脉高压的发生以及肺血管的重构。(创新点3)