论文部分内容阅读
目的 超声技术的发展大大提高了甲状腺结节的检出率,但对于结节的性质判定,目前尚缺乏无创但诊断效能较高的生物标志物。甲状腺癌(Thyroid Cancer,TC)临床分型可能带来完全不同的临床干预,并进而影响预后和远期生存质量,故有必要筛选新型生物标志物用来早期诊断及鉴别诊断TC;本研究通过对不同分型TC患者蛋白质组和脂代谢的分析,筛选有价值的TC新型标志物,并进行验证。方法 利用质谱仪Orbitrap Q-Exactive-plus对31例TC患者(I-IV期):包括15例甲状腺乳头状癌(Papillary Thyroid Cancer,PTC)患者,10例甲状腺髓样癌(Medullary Thyroid Cancer,MTC)患者,6例滤泡性甲状腺癌(Follicular Thyroid Cancer FTC)患者,以及 15 例良性甲状腺结节(Thyroid Nodules,TN)患者和15例健康对照者(Healthy Control,HC)的血清进行蛋白质组分析。利用酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)在223例受试者中初步验证筛选出的6种表达差异蛋白,Amyloid beta A4 protein、Apolipoprotein A-IV、Gelsolin、Contactin-1、Gamma-glutamyl hydrolase、Complement factor H-related protein 1(CFHR1)。之后利用ELISA方法在291例TC(I-IV期)患者(PTC 247例,MTC 38例和FTC 6例)以及69例TN和176例HC中对CFHR1进行了进一步的验证。血清脂质谱分析选择从2013年11月1日至2018年11月11日在北京协和医院就诊,病理结果明确诊断为TN和TC的受试者,同时从2018年5月1日至2018年11月11日在北京协和医院健康查体人群中,筛选出明确诊断无甲状腺疾病的HC。最终获得3875例受试者。分析癌症组(PTC,FTC和MTC)和对照组(TN和HC)脂代谢相关分子胆固醇(cholesterol,CHO),甘油三酯(triglycerides,TG),高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein-cholesterol,HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein-cholesterol,LDL-C),载脂蛋白 A1(apolipoprotein A1,ApoA1)和载脂蛋白B(apolipoprotein B,ApoB)表达水平的差异。结果利用质谱数据非依赖采集技术,筛选出癌症组和对照组的17种差异表达的蛋白质(P<0.05和fold-change ratios≥2或≥0.5)。在初步验证的6种差异蛋白中CFHR1蛋白表达水平在各组中差异较明显(P<0.05)。扩大样本量进一步验证结果表明,与对照组(TN和HC)和PTC组相比,MTC组和FTC组的CFHR1血清水平显著升高(P<0.001)。CFHR1在区分MTC患者和PTC患者时具有更高的鉴别诊断性能(P<0.001),灵敏度为100.0%,特异性为85.08%,曲线下面积为0.93,诊断界值为0.92 ng/mL。与降钙素联合应用后,特异度提高至98.90%;IPA分析LXR/RXR激活通路被抑制,这条通路作为脂质代谢的关键,是本研究中主要的参与途径。脂质谱研究结果表明在男性和女性中,癌症组(PTC、FTC与MTC)和对照组(TN与HC)的总CHO水平差异显著(P<0.05)。在女性中,两组间TG,HDL-C,ApoA1 和 LDL-C/HDL-C 水平有显著性差异(均 P<0.05)。TG 和 LDL-C/HDL-C在癌症组中的水平比对照组高,ApoA1和HDL-C在癌症组中的水平低于对照组。结论 CFHR1鉴别诊断PTC和MTC具有较高的灵敏度和特异性,并且筛选实验结果显示癌症组患者的ApoA1,ApoA2和ApoA4水平低于健康对照组。进一步研究发现癌症组和对照组相比脂质分子的表达存在差异,有必要进一步阐明脂质代谢与癌症之间关联的分子机制,以开发可应用于TC的脂代谢新型生物标志物和治疗靶标。