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动物行为迁移与表达过度指行为对象、行为频率发生改变,是动物在缺乏刺激的单调环境中,行为表达受挫在行为学上的体现,牛的卷舌行为是典型的行为表达过度,也称规避行为,因此是评估动物福利状况的指标之一。本试验通过观察成年肉用母牛卷舌行为,研究卷舌行为的产生对肉牛血清中免疫指标、神经递质及肠道菌群多样性的影响,分析其与成年母牛卷舌行为之间的相关性,进而研究肠道菌群与动物情感和福利状况的影响。为肉牛生产中改善动物福利,提高肉产品品质和增加经济效益提供重要的参考依据。试验1:肉用母牛卷舌行为观测及其与血清免疫功能和神经递质之间的相关性研究(1)随机选择鄂尔多斯市乌审旗某肉牛场40头同龄(4岁)、同胎次(约5胎次)和相同饲养管理条件下的成年肉用繁殖母牛,找出其中不具有卷舌行为的肉牛,将其归为正常对照组(NC),并找出具有典型卷舌行为的肉牛,并将其根据卷舌频率高低,分别归类为轻度卷舌组(RtL))、中度卷舌组(RtM)、重度卷舌组(RtS),连同挑选的正常对照组各选择10头。结合肉眼观察法、即时观察法(Instant observation)和间隔观察法(Interval observation),每天在相同的固定时间段内,观察并记录试验牛卷舌行为发生的频率。(2)每组选择6头试验肉牛,早晨空腹采集血液于10 ml采血管中,泡沫箱加冰袋运输至室内,3000 r/min离心10 min,取上清,分离出血清,置于1.5ml离心管,保存于-20℃冰箱中,以备随时使用。通过ELISA试剂盒测定血清免疫指标IgA、IgG、SIgA、IL-1β、IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10;神经递质 5-HT、DA、GABA、BDNF、ACTH、EPI、NE。试验2:肉牛卷舌行为与肠道微生物多样性之间的相关性研究试验动物和分组同试验1。用直肠采粪法采集直肠新鲜粪便,并置于冻存管,放入液氮罐保存,通过干冰送往测序公司测序。采用PCR扩增技术提取每份样品的DNA并进行16S rDNA基因V3+V4区扩增,使用Thermofisher的IonS5TMXL进行上机测序。正向通用引物为338F:5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3’,反向通用引物为806R:5’-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’。PCR 扩增反应 50 μL体系参考:包括 10 ng/μL(5 μL)模板DNA、5μLTaq聚合酶(5 U/μL;TaKaRa,Japan)以及上下游引物各1 μL(10 μmol/L)。试验 1 研究结果表明,血清 NC 组 IgA、IgG、SIgA、IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-10的浓度显著高于RtL组、RtM组、RtS组(P<0.05);成年肉用母牛血清NC组神经递质5-HT、DA、GABA、BDNF、ACTH、EPI、NE的浓度显著高于RtL 组、RtM 组、RtS 组(P ＜0.05)。其中除了肉牛血清 RtM 组 IgG、IFN-γ、TNF-α、NE浓度高于RtS组,且不一定显著外。血清免疫指标IgA、SIgA、IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10的浓度和神经递质5-HT、DA、GABA、BDNF、ACTH、EPI的浓度随着卷舌频率的增加,浓度值逐步减少。认为卷舌行为的发生与血清免疫功能和神经功能呈负相关关系,卷舌频率越高的成年肉用牛,免疫功能和神经功能越低。试验2研究结果表明,NC组厚壁菌门、瘤胃菌科、毛螺旋菌科、Christensenellaceae、优杆菌属[Eubacterium]_coprostamollgenes_group的显著高于RtL组、RtM组和RtS组(P＜0.05);NC组拟杆菌门和理研菌科及属于理研菌科的Rikenellaceae_RC9_gut_group 显著高于 RtL 组、RtM 组和 RtS 组(P＜0.05);认为认为厚壁菌门、瘤胃菌科、毛螺旋菌科、Christensenellaceae、优杆菌属[Eubacterium]_coprostamollgenes_group的降低和拟杆菌门和理研菌科及属于理研菌科的Rikenellaceae_RC9_gut_group的升高与卷舌行为形成有关。综上所述,成年肉用母牛的卷舌行为极有可能与其免疫功能和神经功能均存在负相关关系,即该品种肉牛卷舌频率越高,血清中的免疫因子和神经递质浓度越低;与此同时,发现该品种成年肉用母牛的卷舌行为还极有可能与体内肠道菌多样性失调也存在相关关系,结果显示,相同的微生物群落相对丰度在不同卷舌频率的试验组间,其百分比差异极显著,因而认为卷舌行为的发生极有可能与肠道菌群多样性失调相关,从而对动物福利造成威胁。