天麻(Gastrodia elata Blume)是兰科天麻属多年生草本植物,作为传统中药,已有悠久的药用历史,广泛被用于治疗癫痫,眩晕,头痛,四肢麻木,风湿病痛等疾病。Micro RNAs(mi RNAs)是一类能调控靶基因转录后沉默的非编码小RNA分子,其功能和作用机制涉及到机体生长发育和信号转导途径等。已有研究表明,植物mi RNA能够进入动物体内,跨界发挥着重要的生物学作用。NF-κB信号通路是免疫、发育和癌症的关键调节通路,广泛参与细胞对各种刺激的反应,尤其是在炎症中发挥着重要的作用。目前,国内外关于天麻的研究主要集中于天麻药用化学成分及其功能,关于天麻micro RNA的研究尚未见报道。在课题组前期研究的基础上,本论文对天麻mi RNA的跨界调控及其对NF-κB信号通路的作用进行了深入研究,为天麻mi RNA的跨界调控作用提供了证据,也为天麻mi RNA的抗炎作用研究奠定了基础。为验证天麻特异mi RNAs在小鼠各个组织内是否存在,我们进行了小鼠灌胃实验,然后通过提取动物组织RNA,逆转录和荧光定量PCR等实验方法,检测了天麻特异mi RNA Gas-mi R01和Gas-mi R02在小鼠各个组织内的含量。结果显示,灌胃后Gas-mi R01和Gas-mi R02在小鼠各个组织内均可检测出,表明Gasmi R01和Gas-mi R02可以通过口服方法进入小鼠体内,且在不同组织中含量随时间段不同有明显差异。通过体外细胞实验我们研究了天麻Gas-mi R01对NF-κB信号通路的作用以及对炎症发生的影响。在实验过程中,利用q RT-PCR、Western Blotting和ELISA等方法分别检测了LPS诱导后BV2细胞内相关炎性因子的m RNA表达量以及NF-κB信号通路中相关蛋白的表达水平。结果发现,Gas-mi R01能下调BV2细胞内相关炎性因子的表达,并能下调p-p65和p-IκBα蛋白的表达进而抑制NF-κB信号通路的活化。上述结果表明Gas-mi R01可以通过调控NF-κB信号通路从而对LPS诱导引起的细胞神经炎症具有一定的抑制作用。为了进一步验证天麻Gas-mi R01的调控功能,我们开展了动物实验,通过构建动物神经炎症模型,同时利用q RT-PCR、ELISA和Western Blotting方法检测小鼠大脑中炎性因子的m RNA表达水平以及NF-κB通路上相关蛋白的表达水平。结果显示Gas-mi R01同样能下调炎症小鼠大脑中炎性因子的表达且能抑制NF-κB信号通路的活化。综上,动物实验与细胞实验结果一致,表明Gas-mi R01可以调控NF-κB信号通路,同时为Gas-mi R01的抗炎作用提供了有力的证据。论文研究结果为探明天麻mi RNA的跨界调控机制奠定了基础,也为后续天麻mi RNAs的研究提供了理论依据。