目的 制备肝癌细胞裂解抗原致敏的人脐血来源树突状细胞(dendritic cell，DC)疫苗，体外诱导淋巴细胞活化产生细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)，进而观察其对人肝癌细胞的体外杀伤效应和在SCID小鼠体内的免疫防治效应。 方法 无菌采集人脐带血，Mini MACS(magnetic activated cell sorting)分离CD34~+干细胞。重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(recombined human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,rhGM-CSF)100μg/ml、重组人肿瘤坏死因子(recombined human tumor necrosis factor，rhTNF)-α 50U/ml诱导CD34~+干细胞向DC分化，同时观察DC分化过程中细胞形态、数量变化及集落形成。用超声破碎的人肝癌细胞BEL-7402冲击DC，制备肿瘤细胞裂解物致敏的DC疫苗，诱导异体脐血或外周血淋巴细胞活化产生CTL，用于体内外抗肿瘤实验。 体外抗肿瘤实验用活细胞计数和中性红比色法检测DC疫苗诱导的人脐血或外周血CTL对人肝癌细胞的杀伤活性。体内抗肿瘤实验选用SCID小鼠为实验动物，分为免疫治疗和免疫保护2大组。免疫治疗组在建立人肝癌荷瘤小鼠模型的基础上，以DC疫苗致敏的人外周血CTL或未致敏的人外周血淋巴细胞(1×10~7)皮下注射治疗荷瘤小鼠，3天后重复治疗1次；免疫保护组小鼠分别以DC疫苗致敏人外周血CTL或未致敏的淋巴细胞(1×10~7)免疫2次，期间间隔3天，第二次免疫4天后用肝癌细胞BEL-7402(2×10~6)攻击。各组均设相应的汕头大学医学院硕士学位论文对照组，肿瘤细胞接种后32天处死动物。以小鼠的肿瘤发病率、肿瘤潜伏期、肿瘤大小和生长速度为检测指标，并进行统计学分析。 结果①经Mini MACS分离人脐血CD34+细胞，其比例约占脐血单个核细胞的0.5%一1%。cD34+细胞在细胞因子thGM一csF、rhTNF一。诱导下，细胞形态由小变大、由圆形逐渐变为不规则形;细胞分裂扩增过程中，数量逐渐增多，形成细胞集落。集落周围的细胞伸出长的树枝状突起，具有成熟DC的形态，并不断从集落脱落下来。经过肿瘤细胞裂解抗原刺激后，DC的胞质突起变得更长、更丰富。②人脐血来源的DC疫苗诱导的CTL对人肝癌细胞BEL一7402的体外杀伤活性明显强于未经DC活化的淋巴细胞(P<0.01)，脐血来源的CTL和外周血来源的CTL的杀伤活性相比较无明显差异(P>0.05)。③DC疫苗诱导人外周血来源的CTL治疗荷瘤小鼠，肿瘤生长速度减慢，肿瘤体积明显小于未经DC致敏的淋巴细胞治疗组(P<0.05)。而用DC疫苗诱导的人外周血CTL免疫小鼠，肝癌细胞攻击后，肿瘤的发病率降低(P<0.05)，发病潜伏期延长(P<0.01)，肿瘤体积减小(P<0.05)。④与DC疫苗诱导的CTL治疗组比较，DC疫苗诱导的CTL免疫保护组肿瘤发病率低(P<0.05)，发病潜伏期延长(P<0.01)，免疫组肿瘤体积和重量较治疗组小(P<0.05)。 结论①人脐血CD34+干细胞含量相对丰富，在细胞因子rhGM一CSF、rhTNF一a诱导下能扩增并分化为成熟DC;DC受肿瘤抗原刺激后突起更长更丰富，进入充分成熟状态。②经肝癌细胞裂解抗原致敏、来源于人脐血的DC疫苗，能明显增强CTL对相应人肝癌细胞的体外杀伤效应，而且DC疫苗对脐血来源的初始型淋巴细胞和外周血来源的淋巴细胞有同样的激活作用。③人脐血来源DC疫苗诱导的CTL能在一定程度上抑制荷瘤小鼠肿瘤细胞的生长，抵御肿瘤细胞对小鼠的攻击，降低肿瘤发病率，具有相应的免疫治疗和免疫保护作用。④脐血来源的DC疫苗抗人肝癌的免疫保护作用强于其对人肝癌的免沮!头大学医学院硕士学位论文疫治疗作用。