DEV基因文库构建、核衣壳蛋白基因的发现及克隆与表达

来源 :四川农业大学 | 被引量 : 24次 | 上传用户:litang007
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
鸭病毒性肠炎(Duck virus enteritis,DVE),俗称鸭瘟(Duck plague,DP)是鸭、鹅和大雁等雁形目水禽的一种急性接触性传染病。感染后,患鸭主要表现为急性败血性过程,其特征是血管损伤、体腔出血、消化道出血(或炎症、坏死)、淋巴器官受损及实质器官退行性变化等,具有较高的发病率和死亡率,是目前水禽养殖业的重要传染病之一。本病病原为鸭病毒性肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV),俗称鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV),亦称鸭疱疹病毒1型(Anatid herpesvirus 1,AHV-1),系疱疹病毒科α-疱疹病毒亚科成员之一,是一种泛嗜性全身性感染的病毒。本研究以DEV CHv株为基本材料,对该毒株进行了提纯研究和基因组酶切分析;构建了DEV基因文库,经比对发现并克隆、鉴定了其核衣壳蛋白基因;利用该基因片段设计引物,建立了基于DEV核衣壳蛋白基因的一种PCR检测方法;同时将该基因克隆到原核表达载体pET32a中,对其进行了表达及其表达产物抗原性的研究。主要内容包括: 1.比较了四种方法对DEV Chv株的提纯效果,并对病毒结构蛋白进行了初步分析:将DEV CHv株经鸭胚和鸭胚成纤维细胞(DEF)进行培养增殖后,收集病毒液,采用沉淀法、层析法、差速离心法和蔗糖密度梯度离心法等4种方法对DEV进行了提纯比较,结果表明:通过DEF增殖、经不连续蔗糖密度梯度法提纯DEV,效果较好,电镜下能观察到纯净、多量的完整病毒粒子;病毒粒子由囊膜、衣壳和核芯等三个部分组成,直径为170nm~190nm;在囊膜与衣壳之间还存在一层较厚的皮层结构。用Bradford法测得纯化病毒液中的病毒含量为0.71mg/mL;经SDS—PAGE电泳发现,DEV结构蛋白主要由11种多肽组成,即VP1(190kD)、VP2(136kD)、VP3(106kD)、VP4(88kD)、VP5(75kD)、VP6(68kD)、VP7(56kD)、VP8(48kD)、VP9(42kD)、VP10(38kD)
其他文献
目的研究脂肪乳注射液生产工艺对乳粒的影响因素。方法以脂肪乳注射液生产工艺中的均质温度、均质压力、均质次数、为影响因素,采用正交试验设计方法进行筛选,通过考察其平均
初中生地理区域认知能力的强弱,取决于教师教学过程中对学生读图、析图能力的培养。可从加强学生读图习惯的培养;激发学生地理学习兴趣,提升绘图能力;强化读图、绘图训练,让
已有的全序广播和多播算法多达近五十种,为了便于人们根据需要从众多算法中进行选择,需要对这些算法进行明确分类.但现有的分类方法都存在着完备性较差,且难以理解等问题.基
提出了一种新的Voronoi图——多色Voronoi图,并证明了它的一些重要性质。多色vomnoi图是在Voronoi图的构造过程中,根据数据集的特性给Voronoi图染色的结果。用多色Voronoi图概
维修FANUC数控系统设备过程中,经常会遇见伺服报警。通过介绍典型的硬件结构、分析相关信号处理,研究FANUC系统中401号伺服报警发生的原因,总结故障排除方法和技巧。
本文简单分析建设工程中招标投标的概念、方式、基本过程和现阶段存在的问题,按照规范化招标投标的要求提出几点规范化建议,探讨建设工程招标投标规范化的重要性。
智能电网的故障分析是维持电网长久运行的重要部分,也是建设智能电网的重要内容。文章针对电网传输过程中出现的停电问题,基于K-means聚类算法电网数据分类技术,以NEWACCU算
由于锅炉的型号千差万别,锅炉构架的形式也相应不同。随着锅炉事故的不断出现,构架的安全设计已引起了广泛的注意。本文从国际趋势、安全设计过程控制、贯标过程控制三方面讨论
为了解决复杂煤层空间建模困难问题,在深入分析复杂煤层建模机制基础上,采用集合论集成的方法和思想,研究了煤层建模方法。结果表明:通过采用集合论集成的数据模型可将空间地
本文从精细化的安全规律分析、确立精细化的监控指标体系、形成精细化的计算机监控系统、实施精细化的走动式管理、建立精细化的系统追问机制等方面进行阐述。提出了四个方面