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猪瘟病毒(CSFV)引起的猪瘟(CSF)是导致猪死亡的重要疫病,给养猪业造成严重的经济损失。目前,疫苗免疫是对其最有效的预防手段。但随着病毒变异、流行毒株改变等原因,传统弱毒疫苗和灭活苗已逐渐不能够满足需求。弱毒苗免疫效果较好,但本身存在散播病毒的危险;灭活疫苗引起的体液免疫应答不完全,免疫效率不高,因此细胞免疫对机体抵抗入侵的病原体起更重要的作用。在细胞免疫过程中,B淋巴细胞活化,多种基因重组产生Ig M、Ig G型抗体(以Ig G为主)结合抗原来介导免疫应答。因此,筛选有效的猪瘟病毒基因及抗体,对研发CSF免疫治疗具有重要意义。本研究由两部分组成。第一部分是对猪的抗体(Ig)谱进行分析:通过PCR获得猪不同发育阶段IGH、IGK和IGL基因,利用IMGT/V-QUEST在线比对、R语言及Graph Pad Prism等工具,分析猪不同发育阶段Ig编码基因的使用频率及多样性。第二部分是CSFV抗体基因的初步筛选:利用CSFV中和表位(aa693-716,aa824-844和aa844-865)筛选猪瘟病毒抗体分泌细胞(ASCs),并利用流式细胞分选术进行分选。单个ASCs的抗体基因经Smart-seq2技术和巢式PCR扩增,克隆到真核表达载体,并转染到人239T细胞系内;并纯化表达的重组蛋白。结果显示:1)IGHV1-4、IGHV1-10和IGHV1S2基因占猪出生后IGHV基因库的80%以上,随着个体发育,IGHV1-6基因的使用频率显著降低,而IGKV1-11基因的使用频率逐渐增加,并且70日龄猪更偏向使用IGLV8家族基因;2)成功从单个CSFV抗体分泌细胞中获得抗体IGH-IGK基因,并获得CSFV抗体重组蛋白。抗体及基因在抗病毒研究中具有重要地位,是新型疫苗和抗病毒药物研究的重要工具。因此本研究为预防及治疗猪瘟疾病奠定基础。