犬瘟热病毒扬州分离株生物学特性研究及融合区序列分析

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对2001年3月至5月期间就诊于扬州大学动物医院疑似感染犬瘟热病毒的犬作流行病学调查和实验室诊断。采用Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)分离病毒,传代细胞出现了明显的细胞变圆、脱落及拉网现象;负染电镜可观察到病毒粒子;接种病料的细胞IFA检测可见特异性的亮绿色荧光,基于上述诊断结果可确诊为犬瘟热病毒感染。利用双琼脂空斑技术对分离病毒进行克隆,并命名为CDV-YZ-0101,CDV-YZ-0102,CDV-YZ-0103,它们对氯仿敏感,对酸、热抵抗力弱,血凝试验其只对禽类红细胞呈弱阳性,细胞毒力(TCID50)分别为10-4.6~10-5.0/ml、10-4.4~10-4.9/ml、10-4.8~10-5.1/ml;形成空斑直径为0.4~0.6mm。 为建立一套完整的检测犬瘟热的分子生物学方法,本研究中设计了一对特异引物,采用经典法提取犬瘟热病毒OP株(标准病毒)的RNA,对PCR循环参数进行了探索,筛选出PCR反应最佳程序为:96℃变性30s,50℃退火1min,72℃延伸30s,共35个循环,72℃延伸5min,4℃保存。结果表明,所建立的检测犬瘟热病毒的RT-PCR方法敏感性强,特异性好。 为探索CDV变异对免疫失败等方面的影响,本研究将分离株与国内外疫苗株的融合区序列与相关的病毒进行比较分析研究。结果表明,分离株与相关病毒株之间是存在部分差别的,而疫苗株之间在此区无差异。这不仅为犬瘟热的频繁暴发提供了理论依据,而且也提醒我们在防制犬瘟热时要综合考虑。
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