第一部分血清ST-PSMD蛋白检测系统的建立及其在肝癌诊断中的应用和意义研究背景原发性肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是我国最常见恶性肿瘤之一,每年新发病例约占全球50%。由于早期症状不典型,出现症状时多属中晚期,临床确诊的肝癌多数为肝癌的三、四期,肿瘤切除后复发、转移率高。最近,肝癌的治疗手段不断发展,但肝癌患者的预后并无明显提高,复发和转移率仍较高。因此早发现、早诊断、早治疗是肿瘤诊治的基本策略,而肿瘤标志物常常是发现早期肿瘤的线索之一。临床上,血清甲胎蛋白(a-fetoprotein, AFP)是目前唯一广泛应用的HCC标志物。但是近年研究报道,AFP诊断HCC的阳性率仅为60%-70%,在小肝癌中敏感性更低,容易造成漏诊；其次在一些良性肝病(慢性肝炎、肝硬化)、生殖性畸胎瘤等患者中也可有升高,故AFP在肝癌的诊断上有一定的假阳性和误诊率。目前尚无任何肿瘤标志物可完全准确的诊断肝癌,所以必须结合多种手段联合检测以提高肝癌的早期诊断率,因此发现新的高敏感性和特异性的血清肿瘤标志物意义重大。因此,临床上需要高敏感和特异性的肝癌血清标志物来鉴别肝脏的良恶性病变,同时为高危人群的筛查提供帮助。HCC血清标志物的研究一直是科学家们的研究的重点,但大多数研究成果难以满足实际应用的需要。探索高敏感及特异性的血清学指标尤为重要。ST-PSMD基因,编码蛋白为人26S蛋白酶体非ATP酶亚基,是蛋白酶体的组分之一。ST-PSMD作为蛋白降解途径中的重要分子,可以选择性的结合到被泛素化标记的蛋白,从而参加和介导蛋白质的降解。其表达异常与多种免疫性疾病相关。我们课题组的前期研究发现ST-PSMD在癌旁和正常肝组织中不表达或表达很低,但在临床肝癌样本中mRNA水平和蛋白水平的表达均较高；同时ST-PSMD也可促进肝癌细胞的恶性生物学表型,并且可以作为肝癌预后评估的标志物；提示ST-PSMD在肝癌的发生发展中发挥着重要的作用,而ST-PSMD作为肝癌血清学诊断标志物的价值仍未得到证实。有研究证实ST-PSMD蛋白在多种实体肿瘤中高表达。我们希望通过本课题的研究,阐明ST-PSMD在肝癌血清学诊断中的应用价值,为临床肝癌的诊断提供指导。研究目的通过对肝癌病人血清中ST-PSMD蛋白水平的检测,深入探讨ST-PSMD在肝癌血清学诊断中的应用价值,为肝癌的诊断提供潜在的标志物。实验方法通过建立特异针对ST-PSMD的ELISA检测系统,研究正常人群,肝硬化病人以及肝癌病人血清中ST-PSMD蛋白的表达情况,进一步明确其在不同人群血清样本中的表达趋势,与AFP血清水平的表达情况进行比较和分析：同时与临床资料作联合分析；比较分析ST-PSMD和AFP在肝癌血清学诊断中的敏感性及特异性；进一步评估联合血清ST-PSMD和AFP在肝癌血清学诊断中的应用价值。实验结果成功建立人血清学ST-PSMD蛋白的酶联免疫吸附检测方法,用此方法成功检测肝癌病人(100例),正常人群(50例),肝硬化患者(20例)血清中ST-PSMD的表达情况。结果显示肝癌病人血清中ST-PSMD的表达明显高于正常人群,差异有统计学意义(P<0.001)；同时显著高于肝硬化患者血清学水平,差异有统计学意义(P<0.001)。Youden指数最大的数值作为鉴别肝癌、肝硬化患者与正常人群的最佳临界值(Cutoff)。 ST-PSMD诊断肝癌的Cutoff值为0.288ng/ml时的敏感性和特异性分别为71%,84.2%。而我们选用临床上血清学AFP检测常规Cutoff值(20ng/ml),肝癌诊断的敏感性为60%,特异性为84.2%,提示血清ST-PSMD有望作为新的肝癌血清学诊断标志物;ST-PSMD与AFP联合使用时肝癌诊断的敏感性为80%,特异性为84.2%,可进一步提高肝癌血清学诊断的敏感性。在肝癌组AFP阴性的患者中有67.5%的患者血清ST-PSMD呈阳性,其在AFP阴性的肝癌患者中诊断敏感性为60%,特异性为84.3%；提示ST-PSMD可提高AFP阴性肝癌患者的诊断率,有助于减少漏诊率。有肝硬化背景的肝癌患者血清中ST-PSMD水平明显高于肝硬化组,差异有统计学意义(P<0.001)；结果提示ST-PSMD有望成为肝脏良恶性疾病鉴别诊断的血清学标志物。结论本课题成功建立了ST-PSMD蛋白的酶联免疫吸附检测系统,检测了ST-PSMD在不同人群中的血清表达水平。结果显示肝癌病人血清中ST-PSMD蛋白的表达明显高于正常人群和肝硬化患者的血清学水平(P<0.001)。我们的研究结果表明,ST-PSMD蛋白有望成为新的肝癌早期血清学诊断标志物,联合使用血清ST-PSMD和AFP可进一步提高肝癌血清学诊断的敏感性,为肝癌临床诊断提供指导；肝硬化肝癌患者血清ST-PSMD水平显著高于肝硬化患者血清水平(P<0.001),其在两者的鉴别诊断中存在较好的敏感性和特异性,提示其可能成为鉴别肝脏良恶性疾病的血清学指标。本课题创新点及潜在应用价值首次建立了人血清中ST-PSMD的ELISA检测方法。首次将ST-PSMD运用于肝癌病人的血清学检测。第二部分 肝脏原发性神经内分泌肿瘤的临床研究研究背景原发性肝脏神经内分泌肿瘤(Primary hepatic neuroendocrine tumor, PHNET)是一种罕见的肝脏肿瘤,大部分患者因没有明显的临床表现而导致诊治较晚。因此PHNET的诊断必须依赖于病理表现和免疫表型,同时还要经过全面的检查和长期的随访。同原发性肝癌一样,手术切除肿瘤是目前主要的治疗手段。虽然有些原发性肝脏神经内分泌肿瘤肿块较大且部位较深,但手术切除仍可以有效的延长病人生存期,曾有文献报道过一例巨大型且进展较快的原发性肝脏神经内分泌肿瘤在手术切除术后无病生存长达4年。对于不适合手术切除的病人可以考虑肝脏移植手术,有文献报道过一例原发性肝脏神经内分泌肿瘤患者肝移植术后无病生存长达7年。目前,学术界尚无统一的组织学分级标准。研究目的通过对东方肝胆外科医院17例原发性肝脏神经内分泌肿瘤(Primary hepatic neuroendocrine tumor, PHNET)的临床病理特征以及临床资料的回顾性分析,提高临床上对该病的认识和诊治水平。实验方法根据消化系统肿瘤WHO分类(2010)神经内分泌肿瘤分级标准对我院17例病理诊断明确的原发性肝脏神经内分泌肿瘤(Primary hepatic neuroendocrine tumor, PHNET)进行分级,评价该系统对PHNET的诊断价值,并对临床资料进行回顾性分析,提高对PHNET的认识。结果17例原发性肝脏神经内分泌肿瘤(PHNET)组织标本进行新标准分型,其中5例因标本因素未能进行分类,12例原发性肝脏神经内分泌肿瘤(PHNET)中NET G1(5例),NET G2(7例),NEC(0例)；17例患者均无明显类癌综合征表现,NET(G1,G2)I临床表现无差异。NET G1组术后无瘤生存率为80%,NET G2组术后无瘤生存率为57.1%。结论原发性肝脏神经内分泌肿瘤(PHNET)临床上罕见,患者多无类癌综合征表现,确诊主要依靠病理表型及分级,原发性肝脏神经内分泌肿瘤(PHNET)的恶性程度及预后判断需要在消化系统神经内分泌肿瘤WHO分类的基础上结合肿瘤大小及有无子灶等多种因素综合判断。本课题创新点及潜在应用价值评价了消化系统肿瘤WHO分类(2010)神经内分泌肿瘤分级标准对原发性肝脏神经内分泌肿瘤(PHNET)的诊断价值。