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犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是一种由犬细小病毒衣壳结构蛋白组成的具有类似天然病毒粒子空间结构的多聚体颗粒。犬细小病毒病毒样颗粒因不含有病毒基因遗传物质,而具有较好的免疫原性和安全性,能有效刺激机体产生良好的免疫反应。近年来,利用CPV VP2蛋白获得的病毒样颗粒,不仅保持了VLP的免疫原性,而且能够模拟CPV自然病毒粒子感染途径,通过VP2蛋白与细胞表面特异受体的结合,实现CPV VLPs的靶向定位或载运。量子点(quantum dot,QD)以其独有的荧光特性在生物成像方面具有良好的应用潜力,但量子点生物相容性差、无靶向结合能力、对细胞和机体具有明显的生物毒性,严重限制了量子点在生物学方面的广泛应用。本研究主要是利用PCR的方法将犬细小病毒的衣壳蛋白VP2基因扩增链接到pSMK载体质粒上,借鉴大肠杆菌表达系统可溶性表达多种病毒样颗粒的研究方法,得到可溶性的VP2蛋白,然后利用病毒衣壳蛋白自组装成病毒样颗粒特性。在体外环境下,以VLP为原料将MPA修饰后的量子点MPA-QDs包裹进入病毒样颗粒内部,形成具有良好生物相容性,且无生物毒性的荧光复合物CPV VLPs-QD。1.本试验验证了巯基乙酸(MAA)、3-巯基丙酸(MPA)对量子点的表面修饰方法。经Nanosizer检测修饰后MAA-QD、MPA-QD的表面电荷相比原始不带电的QD,表面电荷为负,带负电；经过核酸电泳的形式也可以证实修饰后的MPA-QD、MAA-QD带负电荷。2.实验构建pSMK-VP2表达质粒,并实现了His-SUMO-VP2融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达。镍柱亲和层析纯化后,利用SUMO蛋白酶切除了融合蛋白N端的His-SUMO标签,得到能被CPV单克隆抗体免疫识别的VLPs,并以VLPs进一步包裹MPA修饰后的量子点QD,成功获得了CPV VLP-QDs复合物。通过透射电子显微镜(TEM)、凝胶电泳、紫外荧光特性及纳米粒径等分析,证实CPV VLPs-QD复合物具有良好的生物相容性、细胞毒性弱、荧光亮度高、环境稳定性良好等特性。本研究成功构建具有良好生物相容性、细胞毒性弱、荧光亮度高、环境稳定性良好的复合物CPV VLP-QDs,为研究CPV天然病毒粒子侵染细胞的方式及在细胞中的定位情况提供一种基础性研究。本研究后续可利用荧光复合物CPV VLP-QDs免疫接种有机体,通过对细胞和组织间的荧光观察,为研究VLPs引起机体免疫的机理及方式提供基础性研究。