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目的: 研究补肾填精法对原发性卵巢功能不全（primary ovarian insufficiency，POI）患者抗苗勒氏管激素(anti-mullerian homone，AMH)水平的影响。探讨补肾填精法对POI的治疗作用。研究补肾填精法对POI小鼠AMH信号转导通路(AMH/ALK2/Smad1)的影响，探讨补肾填精法治疗POI的作用机制。 方法: 临床研究:收集2014.3～2014.12在广州中医药大学第一附属医院妇科门诊就诊、符合POI诊断标准的患者80例，年龄范围为22～39岁，平均年龄为30岁。根据患者血清FSH水平分为4组:A组（10IU/L＜FSH≤20IU/L）、B组(20IU/L＜FSH≤30IU/L)、C组(30IU/L＜FSH≤40IU/L)、D组(FSH＞40IU/L)，每组各20例，包括中药组10例，中西药组10例，中药组采用补肾填精法治疗，以左归丸为基本方加减，中西药组采用补肾填精法加雌孕激素序贯疗法（补佳乐1mg×21天，qd，于第12天加服黄体酮胶丸100mg，bid×10天）。中药组、中西药组均治疗6个月。采用症状评分观察患者月经及全身症状的改善情况，用电化学发光法检测血清AMH、FSH水平的变化。同时选取年龄在21～39岁的女性健康志愿者20名作为正常组。 实验研究:选取BALB/C8周龄的雌性小鼠40只，随机分为模型组、左归丸组、补佳乐组、空白对照组。另取12月龄BALB/C雌性小鼠9只设为老年组。用含0.03mg小鼠透明带3多肽(ZP3)的溶液0.15ml注射小鼠双后脚掌皮下及腹腔，建立POI动物模型。造模成功后，药物组分别用左归丸2.7g/(Kg·d)、补佳乐0.15mg/(Kg·d)进行灌胃，模型组及空白对照组均予同等量的蒸馏水。连续灌胃4周，每周休息一天。取小鼠血清及卵巢组织，HE染色法观察小鼠卵泡生长情况，电化学发光法检测小鼠血清AMH、FSH的水平，免疫组化法及Westen blot法检测AMH、ALK2、Smad1蛋白在卵巢组织中的表达。 结果: (1)随着年龄增长，正常育龄期女性血清AMH水平逐渐下降，而FSH水平逐渐上升。 (2)治疗后，POI患者月经过少、后期、先后不定期、闭经的情况得到明显改善，治疗的总有效率为75％，其中补肾填精法治疗的有效率为72.5％，A组、B组、C组、D组分别为80％、70％、80％、60％，说明补肾填精法对早期POI患者月经改善的效果更佳。 (3)观察发现，POI患者临床全身症状主要表现为失眠、抑郁不乐，其中C组、D组患者还表现为烘热汗出、身倦疲乏、性欲低下等，经补肾填精法治疗后，各主要症状出现的频数均减少。 (4)与治疗前相比，经补肾填精法治疗，POI患者血清AMH水平均升高，其中A、B、D三组升高明显，且A组中药效果更佳;血清FSH水平均有所下降，其中B、C、D三组下降更明显。 (5)小鼠ZP3溶液注射可成功建立免疫型POI动物模型，表现为小鼠动情周期紊乱，阴道脱落细胞涂片以白细胞为主，时见少量上皮细胞。左归丸治疗后，小鼠动情周期尚规律，以动情期为主，阴道细胞涂片表现为大量的角化上皮细胞。HE染色结果显示，模型组小鼠卵巢生长卵泡比率降低明显（P＜0.01），经左归丸灌胃后，小鼠的卵泡生长比率升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。 (6)观察发现，随鼠龄增加，小鼠血清AMH水平下降，FSH水平上升。与模型组相比，左归丸组小鼠血清AMH水平明显升高，且优于补佳乐组（P＜0.05)，FSH水平显著下降，与补佳乐组比较，无明显差异。 (7)免疫组化法与Western blot法结果显示，AMH、ALK2、Smad1蛋白均在卵泡颗粒细胞胞浆表达。老年鼠卵巢AMH、ALK2、Smad1蛋白表达明显低于空白组。与模型组比较，补佳乐组、左归丸组小鼠的卵巢AMH、Smad1蛋白表达均升高（其中Western blot法检测显示，左归丸组优于补佳乐组），ALK2蛋白表达亦升高（Western blot法检测显示补佳乐组优于左归丸组）。 结论: 1.补肾填精法可改善POI患者月经及全身症状，能降低患者血清FSH水平，上调AMH水平，并可干预POI的进展。 2.卵巢中AMH蛋白表达的降低可能是导致POI发生的因素之一，并可能通过影响AMH/ALK2/Smad1信号转导，影响原始卵泡的募集，从而使卵泡消耗过快。 3.补肾填精方左归丸可上调POI小鼠卵巢AMH蛋白的表达，可能通过影响AMH/ALK2/Smad1信号转导，抑制卵泡的过快募集和消耗，改善卵巢功能。