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目的:观察大鼠全脑缺血/再灌注(I/R)损伤后海马TLR3、TRIF、IL-6的表达规律,探讨TLR3在大鼠全脑缺血/再灌注(I/R)损伤中的意义,为临床脑梗塞的治疗提供新的思路。
方法:取清洁级雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,随机分为假手术组和I/R组。采用Pulsinelli-Brierley4动脉阻塞方法制作大鼠全脑缺血/再灌注损伤模型,在大鼠全脑缺血15min后,分别再灌注6h、12h、24h、48h、72h、96h,采用RT-PCR方法检测再灌注后不同时间的海马的TLR3、TRIF和IL-6三者mRNA的表达情况,并分析TRIF mRNA与TLR3 mRNA、IL-6 mRNA与TLR3 mRNA的相关性,应用免疫组织化学观察在TLR3mRNA表达高峰时TLR3蛋白的表达情况,应用SPSS13.0统计软件包进行数据分析。
结果:1. RT-PCR半定量测定显示:与假手术组相比,大鼠全脑缺血再灌注12h,海马TLR3、TRIF和IL-6三者mRNA表达均开始增加(0.791±0.025)(0.721±0.026)(0.724±0.013),72h达到高峰(1.370±0.024)(0.992±0.026)(1.121±0.013),96h下降(0.70±0.025)(0.735±0.031)(0.769±0.013)仍高于假手术组(0.510±0.017)(0.643±0.023)(0.522±0.011),差异均有统计学意义(P<0.05),6h时(0.517±0.015)(0.646±0.026)(0.524±0.011)三者与假手术组比较没有差异(P>0.05)。
2.免疫组织化学结果显示:再灌注72h时,I/R组海马神经元阳性细胞呈棕黄色,有很强的TLR3免疫活性,TLR3抗体结合主要位于胞浆,多数阳性细胞发生形态学改变,呈梭形或条索形,假手术组未见阳性表达,细胞形态基本正常,形态相对饱满。
3.相关分析结果:TRIFmRNA的表达与TLR3mRNA的表达变化趋势呈线性正相关(r=0.966,P<0.01);IL-6mRNA的表达与TLR3mRNA的表达变化趋势呈线性正相关(r=0.956,P<0.01)。
结论:1.TLR3参与了大鼠全脑缺血/再灌注损伤的病理生理过程。
2.TLR3可能通过激活转接蛋白TRIF进而促使炎性细胞因子IL-6的分泌介导脑缺血再灌注炎性损伤。