本论文以棉铃虫核多角体病毒(Helicoverpa armigera nucleopolyhedrovirus,HearNPV)的结构蛋白HA100、HA44、ODV-E66为研究对象,依靠HaBacHZ8bacmid系统,分别构建了ha100、ha44、odv-e66缺失的Bacmids,对其进行功能研究,论文包括四个章节:　　 第一章以综述的形式扼要介绍了杆状病毒的应用、分类特征、复制周期、结构组成,详细阐述了目前已知的病毒组装必需基因。　　 第二章对HearNPV ha100进行了功能分析。Ha100预测编码约58 kDa的蛋白,表达时相研究显示,HA100于感染后18小时开始表达,表达产物约60kDa:将HA100的N端与EGFP融合瞬时转染HzAM1细胞,显示其定位于细胞质中,病毒超感染后,融合蛋白定位于细胞核内。为了进一步分析HA100的功能功能,运用λ噬菌体Red重组系统构建了缺失ha100的重组病毒。一步生长曲线研究表明ha100的缺失并不会对BV的形成造成影响。电镜观察显示,ha100的缺失不会改变ODV或包涵体的形态。生物测定结果表明:缺失型病毒的半数致死浓度较回复型明显增高,而半致死时间比对照病毒延长24小时,有显著性差异。因此ha100是病毒复制的非必需基因,但可以加速HearNPV口服感染宿主。　　 第三章是本论文的研究重点,我们对HearNPV的重要结构蛋白ha44进行了深入研究。时相分析显示,HA44于病毒感染后18小时开始转录和表达,为晚期基因。构建了缺失ha44的重组Bacmid,电镜观察发现ha44的缺失会导致病毒核衣壳无法形成或核衣壳形态异常,在多角体内也没有发现ODV粒子,表明HA44为病毒核衣壳组装所必需。通过构建EGFP-HA44融合蛋白,观察其定位,发现绿色荧光蛋白定位于细胞核内呈点状聚集分布。另外,还通过构建10个定点突变子(HA441176P,HA44L183P,HA44L190P,HA44L223P,HA44Y230P,HA44L237P,HA44L244P,HA44L183A,HA44L244A和HA44E226A),来研究了HA44上卷曲螺旋结构域的功能。研究发现,L183P与L244P显著降低融合蛋白核定位的聚集程度。另外还通过Bac-to-Bac系统在缺失HA44的重组Bacmid上分别回复上述突变子,转染和感染实验表明L183P及L244P不能产生有感染能力的子代病毒。随后,酵母双杂试验也证实L183和L244是HA44自身相互作用的位点。以上数据表明:HA44参与HearNPV的组装,并且其卷曲结构域所介导的自身相互作用为病毒感染所必需。　　 第四章对HearNPV orf96(odv-e66)的功能进行分析。首先分析了odv-e66的时相,RT-PCR结果显示odv-e66基因的转录产物在感染后18小时检测到,并持续到感染末期,且ODV-E66也于感染后18小时开始表达。为了进一步分析其功能,运用九噬菌体Red重组系统构建了缺失odv-e66的重组病毒,并在此基础上构建了回复型突变株。一步生长曲线结果表明缺失型病毒与回复型病毒及对照病毒之间BV产量无明显差异,证实odv-e66是病毒复制的非必需基因。电镜观察显示缺失型病毒仍然能够形成多角体,但多角体内包埋的ODV的粒子数减少。初步生物测定试验结果显示缺失型病毒仍具有口服感染宿主的能力。