兔出血症病毒（Rabbit hemorrhagic disease virus，RHDV）的基因组为一条单股正链的RNA分子，含有2个开放阅读框（ORF），衣壳蛋白VP60是由位于5’端的开放阅读框（ORF1）编码，它是兔出血症病毒最为重要的保护性抗原。　　目前该病的血清学诊断方法为传统的人“O”型红细胞的血凝抑制试验。由于 RHDV至今不能在体外培养，因此预防该病使用的疫苗仍然为落后的组织灭活苗。但组织灭活苗存在免疫效率低，生物安全危险高等诸多弊端；同时血凝抑制检测方法存在主观性强、重复性差和人血红细胞获取不易等缺点。这些严重限制了我国兔养殖行业的健康发展，现实要求我们研究出快速稳定的RHDV检测方法和安全高效的基因工程疫苗。　　本研究从兔病毒性出血症主要结构蛋白入手，旨在利用兔出血症病毒VP60基因建立一种方便，快速，准确的ELISA检测RHDV特异性抗体的方法；同时建立一种能稳定表达 VP60蛋白的昆虫细胞系，尝试开发 RHDV的基因工程亚疫苗。鉴于此，我们克隆出VP60的编码序列并将其插入pET-32a载体中，获得的重组质粒可在BL21菌株中以包涵体形式高效表达；利用包涵体粗纯技术获得了高纯度的重组VP60蛋白并免疫实验兔，制备了具有高度特异性的多克隆抗体。同时，我们采用融合 PCR技术克隆了 VP60的优势抗原区的两个片段，插入pET-30a载体中，获得重组表达质粒pET30a/AB，转入BL21感受态细胞成功表达了分子量约为36Ku的RHDV VP60的优势抗原区（AB）重组蛋白。Western blot试验证明 AB融合蛋该蛋白能与RHDV抗体发生特异性反应。再以纯化的AB蛋白为诊断抗原，成功建立了检测RHDV抗体的间接ELISA方法。为了得到免疫原性的更好，产量更高且成本低廉的VP60蛋白，我们还将VP60基因克隆到真核表达载体 pMT/BIP-V5-HisA中，然后将重组质粒 BIP/VP60与辅助质粒pCoBlast共同转染入果蝇S2细胞，利用灭稻瘟素进行抗性筛选，再使用有限稀释技术筛选单克隆细胞，最终成功建立了S2-VP60稳转细胞系。　　本研究制备了大量高效的多克隆抗体血清，以 RHDV衣壳蛋白主要优势抗原区为抗原建立了间接 ELISA检测方法，同时构建了可稳定表达 VP60蛋白的果蝇S2细胞系，为下一步研发廉价、高效、安全的抗RHDV感染基因工程疫苗提供了良好的前期准备，也为将来开展 RHDV的流行病学调查，临床检测和疫苗研究等奠定了基础。