【摘 要】
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研究目的:研究目的包括二方面.一方面,用运用EST技术快速经济地发现日本血吸虫(中国大陆株)新基因,丰富有关日本血吸虫(中国大陆株)新基因,丰富有关日本血吸虫(中国大陆林)表达基因
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研究目的:研究目的包括二方面.一方面,用运用EST技术快速经济地发现日本血吸虫(中国大陆株)新基因,丰富有关日本血吸虫(中国大陆株)新基因,丰富有关日本血吸虫(中国大陆林)表达基因知识,为血吸虫疫苗研究打下坚实基础;另一方面,在日本血吸虫(中国大陆林)中克隆Sm16的同源物Sj16基因,在现有的研究基础上进一步研究其免疫调节功能,丰富有关血吸虫免疫逃避知识.另外采用核酸疫苗技术,以Sj16为突破口,探索用免疫方法干扰血吸虫免疫逃避而达到防治血吸虫病的可能性,为血吸虫疫苗的研究提供新思路.结论:运用表达序列标鉴(EST)技术,获得了日本血吸虫(中国大陆朱)成虫132个有EST价值的序列,其中113个成功在GenBankdbEST中登录.通过同源性分析,发现了一些令人感兴趣的基因.此结果表明:EST技术具有快速、经济地获得在关日本血吸虫(中国大陆株)成虫表达基因的知识的价值.用PCR方法成功地扩增Sj16基因编码区序列并进行了序列分析,构建了pcDNA<,3>-Sj16真核表达重组质粒及pGEX-4T-1-Sj16原核表达重组南粒,为进一步研究Sj16基因功能提供了基础.成功地原核表达了Sj16基因并纯化重组Sj16蛋白,观察了重组Sj16蛋白对小鼠免疫功能影响.结果初步提示:日本血吸虫通过分泌Sj16促进宿主淋巴细胞凋亡、抑制宿主巨噬细胞功能及降低宿主IFN-γ的水平可能是其免疫逃避机制之一.运用核酸疫苗技术,观察了在小鼠模型中用含Sj16基因编码区DNA免疫引起机体的免疫反应及抗攻击感染的保护性效果.结果提示:在联合使用免疫佐剂的情况下,用Sj16基因编码区DNA免疫干扰日本血吸虫免疫逃避作用而达到对血吸虫感染的防治是可行的,这为血吸虫疫苗的研究提供了新思路.
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