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非酒精性脂肪肝(NAFLD)是一种广泛存在的慢性肝脏疾病,发病率逐年提高,严重危害到人类健康。NAFLD发病机制复杂,至今还未阐明清楚,比较认可的是“二次打击”学说,认为胰岛素抵抗(IR)是NALFD发生发展的核心环节,脂质代谢紊乱是它的启动因子。目前还没有研究出具有确切疗效的防治NAFLD的药物供患者使用。本研究旨在通过建立三种常见的NAFLD大鼠模型,考察由临床经验方发展而来的健脾疏肝颗粒对NAFLD的药效作用,探讨其可能的作用机制。1健脾疏肝颗粒对乙硫氨酸诱导的NAFLD模型大鼠的影响目的:探讨健脾疏肝颗粒对乙硫氨酸诱导的NAFLD模型大鼠的影响。方法:84只SD大鼠随机分为空白组、模型组、健脾疏肝颗粒高、中、低剂量组(18.6、9.3、4.7 生药/kg)、三七脂肝丸组(1.5g/kg)、易善复组(0.1368g/kg),每组 12只。给药组连续灌胃给药8d,1次/天,给药容积10ml/kg。第8天给药2h后,除空白组外,其余各组灌服1%乙硫氨酸15ml/kg,间隔14h后灌服2%乙硫氨酸18ml/kg,空白组灌服等量蒸馏水。在第二次灌服乙硫氨酸36h后,进行肝脏HE染色和油红O染色,观察肝脏病理学改变,测定大鼠肝指数,检测血清ALT、AST、ALP、HDL-C、LDL-C和肝匀浆 ALT、AST、HDL-C、LDL-C。结果:与空白组比较,模型组大鼠HE染色结果显示肝脏脂肪变性明显,肝细胞明显肿胀,部分细胞核贴壁,细胞胞浆内充满大量大小不一的脂肪空泡,肝小叶界限不清,肝索排列紊乱,可见轻微的炎性细胞浸润,油红O染色可见肝脏大量红染脂滴;肝指数、血清与肝匀浆HDL-C含量均显著降低(P<0.01或P<0.05),血清ALT含量显著升高(P<0.01),AST含量有升高趋势(P>0.05)。肝组织HE染色结果显示,与模型组比较,健脾疏肝颗粒可有效降低肝细胞胞浆内脂肪空泡数量和面积,并使肝小叶结构和肝索排列顺序逐渐恢复正常,油红O染色结果显示,健脾疏肝颗粒可有效减少肝脏脂滴红染面积;给药组肝指数变化不明显(P>0.05),健脾疏肝颗粒中、低剂量组血清ALT含量降低明显(P<0.05,0.01),低剂量组AST显著降低(P<0.05),高剂量组血清HDL-C与低剂量组肝匀浆HDL-C含量有升高趋势(P>0.05)。结论:健脾疏肝颗粒可有效改善乙硫氨酸诱导的NAFLD模型大鼠肝功能异常,减少肝脏脂质蓄积,降低肝细胞脂肪变性程度。2健脾疏肝颗粒对高脂饲料诱导的NAFLD模型大鼠的影响目的:探讨健脾疏肝颗粒对高脂饲料诱导的NAFLD模型大鼠的影响。方法:98只SD大鼠随机分为空白组、模型组、健脾疏肝颗粒高、中、低剂量组(18.6、9.3、4.7g 生药/kg)、三七脂肝丸组(1.5g/kg)、易善复组(0.1368g/kg),每组 14只。除空白组外,其余各组喂饲高脂饲料12w,建立NAFLD模型。造模8w后开始灌胃给药,连续给药4w,给药容积10ml/kg,1次/天,给药期间继续高脂饲料喂养到给药结束。进行肝脏HE染色和油红O染色,观察肝脏病理学改变,测定肝指数,检测肝损伤指标 ALT、AST、ALP、GGT,肝脂TC、TG、HDL-C、LDL-C、VLDL-C 和血脂TC、TG,氧化应激性指标 SOD、MDA、CAT、GSH-PX、GSH,检测 FBG、FINS,计算 HOMA-IR和ISI,检测脂质吸收转运相关指标AOPC2、ADRP和炎症指标TNF-α、IL-1β、IL-6,检测凋亡指标Bax、Bcl-2、Caspase-3的蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠HE染色结果显示肝脏脂肪变性明显,肝细胞胞浆内充满大量脂肪空泡,小空泡逐渐形成了大空泡且数量繁多,细胞核贴壁变小,肝小叶界限不清,肝索排列紊乱,油红O染色可见肝脏明显的脂滴红染,并且小脂滴聚集成大脂滴,以大脂滴为主;肝指数显著增加(P<0.01),血清ALT、AST、ALP、TC、TG、FBG、FINS、HOMA-IR 以及肝匀浆 ALP、TC、TG、LDL-C、MDA、ADRP、IL-6、IL-1β含量显著增加(P<0.05或P<0.01);血清ISI以及肝匀浆HDL-C、SOD、GSH-PX水平显著降低(P<0.05或P<0.01);血清GGT以及肝匀浆TNF-α、AOPC2含量、Caspase3、Bcl-2、Bax表达有增高趋势(P>0.05),肝匀浆CAT含量有降低趋势(P>0.05)。肝组织HE染色结果显示,与模型组比较,健脾疏肝颗粒可有效降低肝细胞胞浆内脂肪空泡大泡性病变,并且减少空泡数量,促进了肝细胞结构的恢复,并使肝小叶结构和肝索排列顺序逐渐回复正常,油红O染色结果显示,健脾疏肝颗粒可有效降低肝脏脂滴红染面积;各给药组大鼠肝指数变化不明显(P>0.05);健脾疏肝颗粒高、中、低剂量组大鼠血清 GGT、TC、FBG、HOMA-IR 和肝匀浆 LDL-C、TNF-α 水平以及 Caspase3、Bcl-2、Bax表达有降低趋势(P>0.05),血清ISI水平有升高趋势(P>0.05),血清TG以及肝匀浆ALP、TC、TG、MDA含量显著降低(P<0.05或P<0.01),肝匀浆HDL-C含量显著升高(P<0.01);健脾疏肝颗粒高剂量组血清ALT以及肝匀浆ADRP、IL-1β含量显著降低(P<0.05或P<0.01),中剂量组血清AST、ALP以及肝匀浆IL-6含量降低明显(P<0.01或P<0.05),低剂量组肝匀浆AOPC2含量显著降低(P<0.01),低剂量组血清FINS有降低趋势(P>0.05),中、低剂量组肝匀浆SOD含量升高明显(P<0.05,0.01),高、中剂量组GSH-PX含量升高明显(P<0.01);各给药组肝匀浆CAT含量无明显变化(P>0.05)。结论:健脾疏肝颗粒可有效降低高脂饲料诱导的NAFLD模型大鼠肝损伤指标以及肝脂和血脂的异常升高,并且有效减轻肝脏脂质蓄积,改善肝脏脂肪变性。其作用机制可能与改善肝脏胰岛素抵抗,调节糖脂代谢紊乱,抗氧化应激和脂质过氧化,改善肝脏炎症,并且促进脂质吸收转运,抑制肝细胞凋亡有关。3健脾疏肝颗粒对四氯化碳诱导的NAFLD模型大鼠的影响目的:探讨健脾疏肝颗粒对CCl4诱导的NAFLD模型大鼠的影响。方法:98只SD大鼠随机分为空白组,模型组,健脾疏肝颗粒高、中、低剂量组(18.6、9.3、4.7 生药/kg)、三七脂肝丸组(1.5g/kg)、易善复组(0.1368g/kg),每组 14只。除空白组外,其余各组皮下注射40%CC14橄榄油溶液,首剂6ml/kg,以后每次3ml/kg,3次/周,造模2w后开始灌胃给药,给药容积10ml/kg,1次/天,连续给药5w,给药期间继续皮下注射40%CCl4橄榄油溶液,给药结束后,进行肝脏HE染色和油红O染色,观察肝脏病理学改变,测定肝指数,检测肝损伤指标ALT、AST、ALP、GGT,肝脂TC、TG、FFA 和血脂 TC、TG、HDL-C、LDL-C,氧化应激指标 SOD、CAT、GSH-PX,肝纤维化指标HPCⅢ、COLⅣ、LN、HA水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠HE染色结果显示肝脏脂肪变性明显,肝细胞胞浆内充满大量脂肪空泡,细胞核贴壁变小,小空泡逐渐形成了大空泡且数量繁多,肝小叶界限不清,肝索排列紊乱,油红O染色可见肝脏大量红染脂滴,脂滴聚集成大油滴遍布胞浆中;肝指数,血清ALT、AST、ALP、GGT、HPCⅢ、COLⅣ、HA以及肝匀浆ALP、TC、TG、FFA含量显著升高(P<0.05或P<0.01),肝匀浆GGT以及血清LN含量有升高趋势(P>0.05),肝匀浆CAT含量显著降低(P<0.01),GSH-PX含量有降低趋势(P>0.05)。肝组织HE染色结果显示,与模型组比较,健脾疏肝颗粒可以改善肝损伤状况,减少大空泡数量,使肝索排列顺序逐渐恢复正常,肝细胞结构也趋于正常,油红O染色结果显示,健脾疏肝颗粒可以有效降低肝脏脂滴红染面积;健脾疏肝颗粒中剂量组肝指数、血清GGT、HA降低明显(P<0.05),肝匀浆CAT含量升高明显(P<0.05);健脾疏肝颗粒高、中、低剂量组肝匀浆TG含量均显著降低(P<0.01),肝匀浆GSH-PX含量有升高趋势(P>0.05),肝匀浆GGT含量有降低趋势(P>0.05);高、中剂量组血清ALP以及肝匀浆FFA含量降低明显(P<0.01或0.05);中、低剂量组血清ALT、AST含量降低显著(P<0.01或0.05),肝匀浆TC含量有降低趋势(P>0.05);高剂量组血清HPCⅢ、COLⅣ含量降低明显(P<0.05);低剂量组血清LN、COLⅣ,肝匀浆ALP降低明显(P<0.01 或 0.05)。结论:健脾疏肝颗粒具有一定的抑制肝纤维化、抗氧化应激作用,进而可有效改善CCl4诱导的NAFLD模型大鼠肝组织肿胀和炎性浸润,以及肝损伤指标的异常升高,调节肝脏脂质代谢,有效减轻肝脏脂质蓄积,改善脂肪变性。