【摘 要】
:
随着资源短缺问题的加剧,人们开始将目光放在可再生资源上,作为世界上产量极丰富的纤维素资源,其可通过纤维素酶的分解产生葡萄糖等,为进一步的加工提供原料。本实验在新的纤维素酶基因克隆、表达、酶学性质和功能位点上做了系统的研究,主要研究内容如下:1.从低温气候的西藏地区采样获得了两种可以分解纤维素的菌株Microbacterium kitamiense和Zhihengliuella halotolera
论文部分内容阅读
随着资源短缺问题的加剧,人们开始将目光放在可再生资源上,作为世界上产量极丰富的纤维素资源,其可通过纤维素酶的分解产生葡萄糖等,为进一步的加工提供原料。本实验在新的纤维素酶基因克隆、表达、酶学性质和功能位点上做了系统的研究,主要研究内容如下:1.从低温气候的西藏地区采样获得了两种可以分解纤维素的菌株Microbacterium kitamiense和Zhihengliuella halotolerans,并成功克隆了四个新型纤维素酶基因,Mkcel5A、MkcelB、ZhcelA和ZhcelB,通过刚果红染色法验证这四个基因编码的蛋白有纤维素酶活力,进一步的表达发现其中三个蛋白为包涵体,另一个表达量较低。2.对四个基因中的一种纤维素酶基因MkCel5A进行深入研究,结果显示其基因的开放阅读框大小为1449 bp,编码了一个大小为482个残基的多肽,分子量为51.38 kDa。序列分析表明MkCel5A蛋白属于糖基水解酶家族5(GH5),并且与内切葡聚糖酶同源性很高。对MkCel5A蛋白经过复性和纯化处理后发现,其最适催化温度为25℃,最适催化pH为7.0,金属离子Rb+和Co2+等可促进酶活力,Cu2+、Mn2+、SDS和EDTA等降低了酶的活性。以CMC-Na为反应底物时,Vmax为1.51 mmol/min*mg,Km值为42.11 mg/mL,野生型酶的标准酶活力为0.6 U/mg。值得注意的是,MkCel5A的最适温度为25℃,在0℃时十分稳定。该酶是一种从未被报道的新型冷活性纤维素酶,对冷活性纤维素酶的功能研究具有参考意义,并且有机会应用于纤维素加工业,特别是低温加工业。3.通过预测和模拟发现MkCel5A蛋白质的结构具有纤维素酶家族典型的碳水化合物结合域(CBD)和催化域(CD)。基于结构的序列比对分析结果显示,MkCel5A的催化结构域312和404位的两个谷氨酸在GH5家族纤维素酶中十分保守,是催化过程中重要的活性位点。本实验使用定点突变技术,将312和404位的谷氨酸突变成丙氨酸,突变体蛋白经过纯化和复性后,突变体E312和E404的绝对酶活力分别为0.003和0.005 U/mg,在CMC平板上的水解圈较小。单点突变实验证明了312和404位的两个谷氨酸是催化过程中重要的活性位点。本研究发现了四个新的纤维素酶基因,并且MkCel5A作为一种新型冷活性酶,为发现较少的冷活性纤维素酶家族增加新的成员,在工业生产和酶的功能研究中有着潜在的价值。
其他文献
随着改革开放后我国经济的快速发展,全球化的趋势不可阻挡,人力资源已经成为关乎组织生存与发展的关键因素,人力资源的管理和开发水准决定着组织核心竞争力的高低。人力资源
目的探讨X线平片、超声成像(USG)、计算机体层摄影术(CT)及磁共振成像(MRI)对原发性腹膜后脂肪瘤的诊断价值,并比较其优点及局限性。方法对29例经手术病理证实的腹膜后脂肪瘤患者的
目前淡水资源紧缺以及水污染问题使人类生存面临着极大的挑战。尤其是以磷酸盐为主的磷过量使用引起的水体富营养化,造成的水体浑浊、缺氧和水华等现象,使许多淡水资源无法使
为提高合理用药准确率和感染性疾病的治疗水平,我们对全院各临床科室送检的各类标本中检出的致病菌种类及其药物敏感率进行分析.
【摘 要】通识课程教学改革对于发展高校的通识教育具有重要意义。本校的通识教育课程存在一些问题,研究者对此进行了调查、研究和分析,以此为基础,针对问题采取措施实施改革方案,取得了良好效果,促进了通识课程教学的长足发展。通识课程的改革,首先必须在管理上为课程正名,引起师生重视。其次,在课程教学方法上,以灵活的形式安排班级人数和上课时间;培养一支优秀的教师队伍,鼓励教师采取丰富多样的教学方法,让教学更有
安阳殷墟是商代晚期都城所在地,自本世纪二十年代束以来,从殷墟发掘出了极其丰富而珍贵的考古资料,包括宫殿建筑遗迹、墓葬(包括大量的殉葬坑)、刻辞甲骨、石器、玉器和陶器
【摘 要】随着信息技术的发展和应用,人类进入了一个大数据时代。在这个大数据时代的背景下,大学生的生活,思想也发生了巨大的改变,当代大学生是祖国未来的建设者和接班人,加强对他们的思想政治教育是我国实施科教兴国和人才强国的重要任务。随着时代的发展,高校的思想政治教育宣传工作也要与时俱进,用新时代中国特色社会主义思想感染全体师生,并学习领悟新时代中国特色社会主义思想中蕴含的新理念新思想新观点新论断,求真
医学课程整合是医学教学改革的方向。上海交通大学医学院将医学遗传与胚胎发育整合课程推广到临床医学专业八年制法文班中,双语教学实施4年,对2014级至2017级法文班共117名学
【摘 要】构建高效课堂的核心在于充分发挥学生的自主性,通过学生的自学与探究,将课堂还给学生,让学生从繁重的负担中解脱出来,真正体验到学习和探索的乐趣。但是在构建高效自主学习的教学中,常发现学生自主学习的动力不足,目的性不强,甚至不知道如何学习,这样就达不到我们的教学目的,使自主学习优势很难体现出来,效果得不到保证。为了培养学生良好的学习习惯,提高自主学习的能力,优化每一个教学环节是很关键的,同时也
实验技能教学是医学基础教学的重要组成内容,不断改革完善的教学内容是整个教学的重要环节。文章通过总结以往实验课教学过程的经验,探索新的改革举措,结合现有资源,建立了以