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沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis C.t)是引发性传播疾病(Sexually Transmitted Diseases STD)及泌尿生殖道感染性疾病的主要病原体。据WHO数据统计,世界范围内每年有约1.27亿沙眼衣原体感染新发病例。近年来,沙眼衣原体引发的泌尿生殖道感染在全球呈逐年增长态势,已居于性传播疾病的首位。流行病学调查显示,衣原体感染症状隐匿,通常不被发现或不被治疗,感染持续存在,最终可引起盆腔炎、异位妊娠、不孕以及男性前列腺炎等多种严重并发症。C.t感染生殖道后亦可协同人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus HPV)的感染并增加HIV传播的危险性,且与宫颈鳞状细胞癌(Squamous Cell Carcinoma SCC)发病率呈正相关。因此,早期开展C.t感染的筛查,尽早发现感染者和无症状带菌者并给予充分治疗,对C.t传播的防控具有重要意义。然而我国现有的各种检测方法中存在取材痛苦、敏感性和特异性不高、结果判定有主观性等各种缺陷,从而不适于作为C.t的筛查手段。而国内现阶段大规模采用的C.t检测试剂盒所针对的抗原蛋白大部分是主外膜蛋白(Major outer membrane protein MOMP)、热休克蛋白60(Heat shock protein HSP-60)和脂多糖(Lipopolysaccharide Lps)这三种抗原。其中MOMP和HSP-60有较好的抗原性及特异性,但其抗原性排名均未在前20种免疫优势蛋白之列。Lps又缺乏特异性,易与其它病原体Lps抗体产生交叉反应而影响检测的准确性。因此,为优化沙眼衣原体感染的实验室筛查方法,提高检测的敏感性和特异性,我们在以往研究的基础上,选取了Pgp3、CT694和CT875这3种C.t特异性免疫优势蛋白的组合,并收集了天津医科大学总医院非性病门诊15-40岁性活跃人群血清300例,运用酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay ELISA)检测血清中上述三种蛋白的抗体存在情况,同时对每一份血清样本均进行微量免疫荧光(Microimmunofluorescence MIF)检测,通过比对两种方法的检测结果,了解新建立ELISA方法的敏感性和特异性。目的:表达3种C.t特异性的免疫优势蛋白:衣原体质粒编码蛋白3(Pgp3)、Ct875编码蛋白(CT875)、Ct694编码蛋白(CT694)。收集天津医科大学总医院非性病门诊性活跃人群血清共300份。ELISA法检测血清中上述三种蛋白抗体的存在情况,并与MIF法检测结果相比对,了解新建立ELISA方法的敏感性与特异性。方法:将编码上述三种蛋白的基因重组质粒转化入大肠杆菌,琼脂糖凝胶电泳鉴定转化成功后,将菌液扩大培养,IPTG诱导表达,超声碎菌获得蛋白。表达成功的蛋白经GST Magbeads纯化,SDS电泳鉴定。收集天津医科大学总医院非性病门诊15-40岁就诊者血清共300例。用所得蛋白裂解液包被谷胱甘肽预包被的ELISA96孔板,饱和板底的谷胱甘肽,分别加入制备好的血清、鼠源性单克隆抗体作为一抗,HRP标记的羊抗人、羊抗鼠IgG作为二抗,运用ELISA方法检测各血清样本中三种蛋白的存在情况。制备衣原体EB抗原片,分别以与兔抗EB抗体和血清样本为I抗,FITC标记的羊抗兔IgG抗体和Cy3标记的羊抗人IgG抗体为Ⅱ抗,MIF法检测血清抗体存在情况。比较两种方法的检测结果。结果:1.三种蛋白重组质粒转化成功,蛋白成功表达。2.ELISA结果:300例非性病门诊性活跃人群血清筛查结果如下:共筛出衣原体感染阳性者63例。沙眼衣原体感染总阳性率21%。其中15~20岁年龄组阳性者7例,阳性率21.88%;21~25岁年龄组阳性者9例,阳性率19.15%;26~30岁年龄组阳性者22例,阳性率25.88%;31~35岁年龄组阳性者17例,阳性率21.52%;36~40岁年龄组阳性者8例,阳性率14.04%。3.MIF结果:共筛选出沙眼衣原体感染阳性者65例,阴性者235例。4.两种检测方法比对结果:63例ELISA法阳性结果血清中,62例微量免疫荧光法结果阳性,1例阴性。237例ELISA阴性结果血清中,234例微量免疫荧光结果阴性,3例阳性。以MIF法为标准,3种免疫优势蛋白组合筛选检测的敏感度为95.38%(62/62+3),特异度为99.57%(234/234+1)。结论:1.新建立ELISA方法对天津市性活跃人群沙眼衣原体Pgp3、CT875、CT694三种免疫优势蛋白抗体的总检出率为21%。2.新建立的ELISA方法具有较高的敏感度与特异度,适合用于衣原体感染的初筛。