本论文探讨了香附四物汤用于妇科气滞血瘀证原发性痛经大鼠的体内过程,通过建立适宜的病证结合模型,初步分析药物体内药代动力学特征、组织分布特征、外源性代谢产物和代谢组学轮廓,获得香附四物汤效应成分体内代谢特征及相关内源性生物标志物群的信息,初步阐释香附四物汤用于妇科气滞血瘀证原发性痛经大鼠体内过程的作用机理,为相关病证临床诊断及合理用药提供实验依据和参考。本论文共分为四个章节讨论,各章节的主要内容及研究结果如下：一、文献研究该部分对相关文献进行整理,较系统地对气滞血瘀证模型及评价方法的建立、中药复方在神经内分泌免疫网络领域的研究概况、基于体内代谢过程的中药治疗血瘀证的研究进展进行了综述和文献研究,为科学问题的提出和论文设计提供指引。二、气滞血瘀证大鼠模型建立与评价(一)气滞血瘀证大鼠模型建立及香附四物汤干预作用初步分析采用0.9mg·kg-1·d-1肾上腺素长期注射并结合慢性不可预见性刺激复制大鼠气滞血瘀证模型,中剂量和高剂量组的全血黏度(高、中、低切变率)、血浆黏度和血压积等血液流变指标均具有比较明显变化,初步判断模型复制成功。给予香附四物汤临床等效剂量6倍量时对气滞血瘀证大鼠模型血液流变学改善作用最明显。(二)适宜于气滞血瘀证妇科疾病特点的大鼠模型评价体系建立选用SD雌性大鼠,采用两周皮下注射盐酸肾上腺素及随机昼夜颠倒、冰水游泳、烘箱热烘、噪音刺激、悬尾等慢性不可预见性刺激复制模型,灌胃香附四物汤、少腹逐瘀汤及阳性对照药阿司匹林,以血液流变学、凝血四项指标、四诊信息(爪、尾、舌数码拍照；体温检测；体重；摄食量；心电图采集；旷场自主活动)、证候积分综合评价模型。与正常组相比,模型组在血液流变学、凝血四项指标、动物行为学、体重、饮食量、证候积分、心率方面均有明显变化；拍摄舌象、爪像经Photoshop7.0分析所得大红色(r)、绿色(g),蓝色(b)的百分含量与正常组相比有显著性差异；阿司匹林及香附四物汤给药组在血液流变学、凝血四项、动物行为学、体重、饮食量、心率、证候积分及舌、尾r、g、b有显著改善作用,而少腹逐瘀汤未见显著的改善作用。该结果为气滞血瘀证大鼠模型评价体系研究提供借鉴。(三)香附四物汤对气滞血瘀证雌性大鼠NEI网络的调控与影响采用酶联免疫法及免疫组化法测定气滞血瘀证模型大鼠给予香附四物汤干预前后血浆中白介素-6、白三烯B4、雌二醇、孕酮、前列腺素E2、一氧化氮等因子含量及下丘脑组织中β-内啡肽水平。模型组血液流变学指标显著升高,血浆凝血酶时间及活化部分凝血活酶时间显著缩短,凝血酶原时间及纤维蛋白原无显著改变；血浆中白介素-6、孕酮含量显著升高,雌二醇、前列腺素E2、一氧化氮含量显著降低,白三烯B4含量无显著变化；下丘脑组织p-内啡肽蛋白表达显著降低；香附四物汤给药组对气滞血瘀证模型有明显改善作用。PLS-DA统计分析结果表明,全血黏度(30S-1)、血浆黏度、凝血酶时间、水平运动次数、p-内啡肽荧光表达面积、垂直运动次数、p-内啡肽荧光表达强度、中心格停留时间、雌二醇、孕酮、前列腺素E2为主要差异指标,提示香附四物汤对气滞血瘀证雌性大鼠的血液、神经、内分泌、免疫系统相关生物学指标具有明确的调控作用。三、香附四物汤药代动力学及组织分布研究(一)香附四物汤在原发性痛经模型大鼠体内的药代动力学及组织分布的研究将SD雌性大鼠分为正常组和原发性痛经模型大鼠,于给药(香附四物汤效应部位)前0min,灌胃后5、15、30、60、120、240、360、480、1440min眼后丛静脉取血浆样品,于灌胃后30min,60min,120min后脱颈处死取各组织。采用LC-TQ/MS技术,对效应部位中延胡索乙素、普鲁托品、小檗碱和四氢黄连碱四种生物碱在大鼠血浆及各脏器组织中的含量进行检测,并比较其在正常大鼠和原发性痛经模型大鼠体内药动学及组织分布特征。延胡索乙素、普鲁托品和小檗碱在正常组和原发性痛经模型组大鼠体内清除率降低,药-时曲线下面积增加,药物在体内滞留时间延长,达峰浓度提高,达峰时间延长,药动学参数均有显著性差异,四氢黄连碱在大鼠体内各指标未发现显著差异。由组织分布结果可知,三种生物碱在血管外系统广泛分布,特别是在与原发性痛经病证直接关联的脏器子宫和卵巢中均检测到,且含量较高。由同组大鼠同一脏器中不同时间点样品中同种效应成分含量比较可以知道,无论在正常还是模型大鼠体内,各类成分均在60min时含量均达到最高。与正常大鼠相比,气滞血瘀证大鼠体内各成分在相同时间点同一脏器组织中含量均显著高于正常组大鼠。(二)香附四物汤在气滞血瘀证模型大鼠体内的药代动力学研究采用LC-TQ/MS技术,比较正常大鼠和模型大鼠灌胃香附四物汤全方及其效应部位后血浆中阿魏酸、芍药内酯苷、芍药苷、普鲁托品、延胡索乙素、四氢非洲防己碱、香草酸7种主要效应成分在体内的药动学特征。口服全方和部位后,与正常组相比,模型组大鼠体内的阿魏酸、延胡索乙素的Cmax提高、AUC0-t增加,普鲁托品、四氢非洲防己碱、芍药内酯苷、芍药苷、香草酸的Cmax降低、AUCo-t减少；正常大鼠和模型组大鼠给药后,与口服全方组相比,口服部位后大鼠体内的7种成分的Cmax显著降低,AUCo-t显著减少,提示病理状态下,阿魏酸、延胡索乙素的吸收程度提高；口服全方组的各成分吸收程度大于口服部位组。四、香附四物汤用于气滞血瘀证模型大鼠的体内代谢研究(一)香附四物汤在气滞血瘀证模型大鼠体内代谢产物研究使用UPLC-Q-TOF-MS联用技术,通过MetaboLynx软件处理快速分析了香附四物汤全方及效应部位在气滞血瘀证模型大鼠体内代谢产物,从香附四物汤给药后大鼠血浆、尿液、胆汁中初步鉴定了20个代谢产物成分,包括阿魏酸的3个代谢产物,香草酸的7个代谢产物,普鲁托品的3个代谢产物,延胡索乙素的6个代谢产物,四氢非洲防己碱的1个代谢产物。主要发生甲基化、硫酸化结合、羟基化、氨基酸结合、还原、葡萄糖醛酸化等代谢过程。(二)基于代谢组学方法的气滞血瘀证大鼠代谢轮廓及香附四物汤干预效应研究采用UPLC-Q-TOF-MS技术,结合主成分分析和正交偏最小二乘判别分析法等技术,探讨采用皮下注射Adr附加慢性不可预见性刺激复制的气滞血瘀证大鼠的代谢扰动规律以及香附四物汤干预后大鼠血浆和尿液代谢轮廓的变化。经MarkerLynx软件对给药前正常和模型大鼠血浆、尿液的检测数据进行分析,筛选出模型组与其他各组有统计学意义的差异化合物,正离子条件下,血浆中存在4个标志性代谢物,尿液中存在4个标志性代谢物：负离子条件下,血浆中存在3个标志性代谢物,尿液中存在7个标志性代谢物。该18个潜在的内源性物质在给以香附四物汤效应部位组大鼠的血浆及尿液样品中均被发现并且有不同程度的恢复。分析生物代谢通路时,初步筛选出6条代谢通路作为潜在的气滞血瘀模型通路,分别是Taurine and hypotaurine metabolism(牛磺酸和亚牛磺酸代谢)、Glycerolipid metabolism(甘油酯代谢)、Starch and sucrose metabolism(淀粉和蔗糖代谢)、Inositol phosphate metabolism(磷酸肌醇代谢)、Glycerophospholipid metabolism(甘油磷脂代谢)、Steroid hormone biosynthesis(甾体激素类代谢)。