【摘 要】
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目的：构建靶向GRP78的shRNA质粒表达载体(PGPU6/GFP/Neo-GRP78),明确其对结直肠癌RKO细胞增殖及细胞周期影响。探讨GRP78与AKT及ERK信号通路之间的关系。方法：通过脂质体Lipofe
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目的：构建靶向GRP78的shRNA质粒表达载体(PGPU6/GFP/Neo-GRP78),明确其对结直肠癌RKO细胞增殖及细胞周期影响。探讨GRP78与AKT及ERK信号通路之间的关系。方法：通过脂质体Lipofectamin2000将靶向GRP78质粒转入人结直肠癌RKO细胞,G418筛选建立稳定转染细胞系,Western-blot方法测定GRP78蛋白在RKO细胞中的表达；CCK-8检测RKO细胞接种后24,48及72h的增殖能力；流式细胞仪观察细胞周期分布；Western-blot检测p-AKT, t-AKT, p-ERKl/2及t-ERK1/2蛋白表达。结果：shRNA-GRP78可以显著抑制GRP78在RKO细胞中的表达；细胞接种后24h,3组细胞的增殖能力没有显著差异(P0.05),细胞接种后48h及72h, GRP78表达下调可显著抑制RKO细胞的增殖能力(P<0.05)；同时,细胞周期显示,处于S期的细胞数量明显降低(P<0.05)；转染shRNA-GRP78后,Western-blot结果显示,AKT及ERK磷酸化水平均显著降低(P<0.05)。结论：在体外,GRP78可以促进结直肠癌细胞的增殖,影响细胞周期的分布；GRP78可能通过AKT及ERK信号通路促进细胞的增殖。
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