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肿瘤多药耐药(multidrug resistance,MDR)的产生是恶性肿瘤化疗失败的主要原因之一,这种现象在乳腺癌的治疗过程中表现极为突出。本论文主要通过化疗药紫杉醇体外短期干预人乳腺癌细胞MDA-MB-231,测定其药敏性变化,并研究其耐药相关蛋白、转录因子、细胞周期和细胞凋亡等方面的变化,为从分子水平分析耐药细胞的各项机制提供依据,同时也为临床用药提供参考。本课题首先用紫杉醇体外短期干预MDA-MB-231细胞,利用黄酰罗丹明B(SRB)法检测干预后的细胞对多种化疗药物药敏性的改变。结果发现细胞经紫杉醇干预后其对包括阿霉素、米托蒽醌等在内的多种化疗药物的半数抑制率(IC50)提高,即产生了一定的耐药性。免疫细胞化学检测了包括P-糖蛋白(P-gp)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和肺耐药蛋白(LRP)等多种耐药相关蛋白的表达差异。结果显示除P-gp蛋白表达上调外,其余多种耐药相关蛋白均无明显表达差异。逆转录PCR (RT-PCR)进一步证明P-gp的基因MDR1表达出现上调。这说明MDA-MB-231细胞经紫杉醇体外短期干预后MDR1在转录和翻译水平上发生改变。流式细胞术分析紫杉醇干预后细胞周期的变化,结果显示MDA-MB-231经干预后8h S期细胞明显增多。免疫细胞化学和western blot检测周期依赖型转录因子Y-box结合蛋白1(YB-1)的表达情况,发现干预8h后的细胞其胞浆内YB-1表达下降而胞核内YB-1表达上调,提示YB-1可能参与MDR现象。Hoechst 33342染色并经过荧光倒置显微镜分析,结果显示MDA-MB-231经干预后出现细胞凋亡抑制现象。本实验用紫杉醇短期干预人乳腺癌细胞MDA-MB-231,发现细胞的药敏性降低。同时发现细胞中P-gp蛋白表达上调、YB-1核定位增加以及细胞出现凋亡抑制等现象。以上结果说明了化疗药作为体外胁迫条件可瞬时诱导乳腺癌细胞产生耐药性,且这种耐药性是多因素共同作用的结果。本实验为分子水平的耐药机理探讨提供了一些思路和实验依据。