电针对血管性痴呆大鼠不同分期事件相关电位和海马神经元的影响以及早期预警信号的探索

来源 :安徽中医药大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:seaflower0000
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目的:(1)建立血管性痴呆(Vascular dementia,VD)大鼠模型,探讨事件相关电位(P300)在VD大鼠认知功能评价中的价值;(2)观察电针对VD大鼠P300及海马神经元的影响;(3)观察大鼠P300和海马神经元的变化与VD的相关性;(4)探讨P300在VD早期诊断中的预警价值及针灸疗效的价评。方法:选择清洁级成年(18个月月龄)Wistar大鼠120只,体重(400±50)g。经跳台实验筛选保留110只,通过电脑随机数字法选取10只为正常组,再随机选20只用于假造模,剩余80只采用四血管阻断法(four vessel occlusion,4-VO)造模。造模4天后,通过神经行为学评分和记忆能力测试确定造模成功并保留40只。在假模型大鼠和模型大鼠中各选取10只,命名为假模型组和模型组。剩余的30只模型大鼠随机分为电针组、西药组、模型对照组,每组10只,和剩余的10只假模型大鼠为假模型组,一共四组,用于实验研究。对正常组、模型组与假模型组,进行记忆成绩测试、神经行为学评分和P300测试,然后断头取脑保存脑组织。电针组进行电针治疗每天1次,7次为1疗程,共治疗4个疗程,两个疗程之间休息1天,常规饲养;西药组给予尼莫地平灌胃2次/天,疗程与针灸治疗组平行;模型对照组、假模型组与电针组平行饲养,给予生理盐水灌胃。各个疗程结束后分别进行记忆成绩测试、神经行为学评分及P300测试,作为分析观察指标。四个疗程结束后断头取脑,取各组大鼠脑组织,与之前保存的脑组织一同进行组织学观察,观察海马CA1区神经元变化。采用“统计产品与服务解决方案”软件(Statistical Product and Service Solutions,SPSS)17.0对实验数据进行统计分析。结果:(1)造模后第4天对各组大鼠记忆能力、神经行为学评分及P300测试。结果显示:模型组的大鼠记忆成绩的潜伏期明显缩短、错误次数明显增加,神经行为学评分明显提高,P300的潜伏期明显延长、波幅显著下降。与正常组相比,假模型组的各项指标差异均无统计学意义(p>0.05),模型组的各项指标差异均有统计学意义(均为p<0.01);与假模型组相比,模型组的各项指标差异均有统计学意义(均为p<0.01)。结果表明:VD大鼠模型建造成功;VD大鼠P300潜伏期明显延长、波幅明显降低。(2)每个疗程结束2小时后,分别对大鼠进行记忆能力测试、神经行为学评分及P300测试,记录数据并进行统计分析,结果如下:第一疗程结果:电针组和西药组的记忆成绩的潜伏期延长和错误次数减少,神经行为学评分降低,P300的潜伏期缩短和波幅升高。与假模型组相比,模型对照组、电针组、西药组的各项指标差异均有统计学意义(p<0.05或p<0.01);与模型对照组相比,电针组和西药组的各项指标差异均无统计学意义(p>0.05);与西药组相比,电针组的各项指标差异均无统计学意义(p>0.05)。结果表明:一个疗程后,电针、西药治疗血管性痴呆在提高记忆能力、降低神经行为学评分及改善P300等方面均有一定的作用,但效果不明显。第二个疗程结果:与第一疗程相比各项指标均有改善,电针组和西药组记忆成绩测试的潜伏期延长和错误次数减少,神经行为学评分降低及P300的潜伏期缩短和波幅升高。与假模型组相比,模型对照组的各项指标差异均有统计学意义(p<0.01),电针组和西药组的神经行为学评分、记忆成绩测试的潜伏期和P300的波幅、潜伏期差异均有统计学意义(p<0.01),电针组和西药组的记忆成绩测试的错误次数差异有统计学意义(p<0.05);与模型对照组相比,电针组和西药组的神经行为学评分和记忆成绩测试的潜伏期、错误次数差异均有统计学意义(p<0.05或p<0.01),电针组和西药组的P300波幅、潜伏期差异无统计学意义(p>0.05);与西药组相比,电针组的各项指标差异均无统计学意义(p>0.05)。结果表明:两个疗程后,电针、西药治疗血管性痴呆在记忆成绩、神经行为学评分方面均见不同程度的改善效果,且效果显著;在P300的潜伏期和波幅方面也有所改善,但效果不明显。第三个疗程结果:电针、西药对VD大鼠记忆成绩、神经行为学评分及P300方面均有显著性改善。与假模型组相比,模型对照组的各项指标差异均有统计学意义(p<0.01),电针组的记忆成绩结果、西药组记忆成绩的错误次数、电针组和西药组的P300结果差异均无统计学意义(p>0.05),电针组的神经行为学评分差异有统计学意义(p<0.05),西药组的神经行为学评分和记忆成绩的潜伏期差异有统计学意义(p<0.01);与模型对照组相比,电针组和西药组的各项指标差异均有统计学意义(p<0.05或p<0.01);与西药组相比,电针组的各项指标差异均无统计学意义(p>0.05)。结果表明:三个疗程后,电针、西药治疗血管性痴呆在记忆成绩、神经行为学评分、P300的潜伏期和波幅方面均见效果,且疗效显著。第四个疗程结果:电针、西药对VD大鼠记忆成绩、神经行为学评分及P300方面均有较好的疗效,VD大鼠的记忆成绩测试的潜伏期明显延长、错误次数明显减少,P300的潜伏期明显缩短、波幅明显升高,神经行为学评分明显降低。与假模型组相比,模型对照组的各项指标差异均有统计学意义(p<0.01),电针组的记忆成绩结果和P300结果差异无统计学意义(p>0.05),西药组的记忆成绩的错误次数和P300的波幅差异无统计学意义(p>0.05),电针组和西药组的神经行为学评分、西药组记忆成绩的潜伏期、西药组P300的潜伏期差异有统计学意义(p<0.05或p<0.01);与模型对照组相比,电针组和西药组的各项指标差异均有统计学意义(p<0.05或p<0.01);与西药组相比,电针组记忆成绩的潜伏期和P300的潜伏期差异有统计学意义(p<0.05),其余各项指标差异无统计学意义(p>0.05)。结果表明:四个疗程后,电针、西药治疗VD大鼠在记忆成绩、神经行为学评分、P300的潜伏期和波幅方面均见显著效果。在改善记忆成绩的潜伏期和P300的潜伏期方面,电针比西药的效果更为显著。(3)HE染色后,应用(40×10倍)光镜下可以观察到:1.治疗前:正常组与假模型海马CA1区神经元排列整齐、密集,细胞结构正常,核仁清晰,核居中,形态正常;模型组海马CA1区神经元排列紊乱、稀疏,体积变小,轮廓模糊,细胞间距变大,核固缩成三角形或不规则形,见散在严重变性坏死细胞。三组经分析后的大鼠海马CA1区锥体细胞(完整胞核的神经元)的存活数,正常组与假模型组海马CA1区锥体细胞数较多,模型组海马CA1区锥体细胞数为较少。与正常组相比,假模型组差异无统计学意义(P>0.05),模型组差异有统计学意义(p<0.01);与假模型组相比,模型组差异有统计学意义(p<0.01)。2.四个疗程结束后:电针组、西药组海马CA1区神经元排列尚整齐,结构接近正常,无严重变性,存在少量散在的变性坏死神经元;模型对照组海马CA1区锥体细胞层神经元稀疏,排列紊乱且神经元形态不完整,轮廓模糊、界限不清,细胞间距大,见散在变性坏死神经元;假模型组海马CA1区锥体细胞同正常组,未见改变。经过四个疗程的治疗,结果显示:电针组、西药组的海马CA1区锥体存活的细胞数较模型组明显增多。与假模型组相比,模型组差异有统计学意义(P<0.01),电针组差异无统计学意义(p>0.05),西药组差异有统计学意义(P<0.05);与模型对照组神经元数相比,电针组差异有统计学意义(P<0.01),西药组差异有统计学意义(P<0.05);与西药组相比,电针组差异无统计学意义(p>0.05)。结果表明:造模大鼠神经元严重变性并大量丢失,假手术对大鼠海马神经元的改变无影响;经四个疗程治疗后,电针、西药治疗对变性神经元趋向正常方面改善均有显著效果,电针疗效更为显著。结论:(1)电针能显著提高VD大鼠的学习记忆能力、降低神经行为学评分,是治疗VD的有效方法;(2)电针可以改善VD大鼠海马CA1的神经元变性,增加其神经元数目,促进其恢复,这可能是临床针灸治疗VD有效的作用机理之一;(3)电针治疗VD大鼠可以使其P300的潜伏期缩短、波幅升高,这可能是临床针灸治疗VD有效的又一作用机理;(4)P300与记忆成绩、神经行为学评分及海马神经元的改变均存在着一致性,且较神经行为学评分敏感,较海马神经元的检测更具有操作性,可以一定程度的反映VD大鼠的认知功能的损害程度,对VD的早期诊断和评定VD的病情程度有重要的参考价值。
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