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目的:研究四妙勇安汤醇沉药液对体外培养的人脐静脉内皮细胞(Human umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC)缺氧损伤模型的影响,探讨四妙勇安汤醇沉药液对缺氧人脐静脉内皮细胞炎症因子表达的影响,从而研究四妙勇安汤对血管缺血灌注损伤的保护作用机制。
方法:制备四妙勇安汤的醇沉药液;人脐静脉内皮细胞株进行传代培养。将实验用细胞分为三组,分别为(1)正常细胞组:正常的人脐静脉内皮细胞加入正常培养液,放入37℃5％CO2培养箱培养24h;(2)模型组:对人脐静脉内皮细胞进行缺氧处理后,加入正常培养液,然后放入37℃5％CO2培养箱进行培养24h;(3)四妙勇安汤组:对人脐静脉内皮细胞进行缺氧处理后,加入含10％四妙勇安汤醇沉药液的细胞培养液后,放入37℃5％CO2培养箱继续培养24h。用酶联免疫法测定各组细胞中白细胞介素-6(interleukin,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-alpha,TNF-α)的表达;并用免疫组织化学方法检测各组细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)生成量的表达,用倒置相差显微镜观察各实验组细胞中棕黄色颗粒数目。
结果:三组细胞IL-6、TNF-α以及VEGF生成量的表达量结果经方差分析均为p＜0.01,均数做两两比较,结果差异均有显着性。
①正常组内皮细胞IL-6、 TNF-α表达均为最低,VEGF表达为最高;
②模型组细胞IL-6、TNF-α表达均为最高,VEGF表达为最低;
③四妙勇安汤醇沉药组IL-6、TNF-α表达均介于正常组和模型组之间,高于正常组,低于模型组。VEGF也介于正常组和模型组之间,低于正常组,高于模型组。三组细胞三种检测指标均数做两两比较,均为p＜0.01,差异均有显着性。
结论:四妙勇安汤对缺氧所致的人脐静脉内皮细胞炎症因子的表达有明显影响,从而可以对损伤的血管内皮细胞具有一定的保护作用,其作用机制可能与①四妙勇安汤可能减轻缺氧对内皮细胞的损伤,抑制炎症因子的分泌,降低炎症反应,从而达到对内皮细胞的保护作用;②四妙勇安汤可以促进缺氧内皮细胞的免疫应答反应,从而起到保护血管内皮的作用。③四妙勇安汤增加细胞中VEGF生成量的表达,可能影响细胞的内分泌功能,减轻缺氧所致的内皮细胞凋亡、坏死,促进血管新生。四妙勇安汤对缺氧人脐静脉内皮细胞保护作用的其他机制还有待于进一步的实验研究。