【摘 要】
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细胞活性检测剂是指用于检测细胞生理状态和功能是否正常的一类生物试剂。该类生物试剂中，含水溶性三苯基四氮唑盐类的试剂应用前景很好，而CellCountingKit-8即是其中的一种。C
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细胞活性检测剂是指用于检测细胞生理状态和功能是否正常的一类生物试剂。该类生物试剂中，含水溶性三苯基四氮唑盐类的试剂应用前景很好，而CellCountingKit-8即是其中的一种。CellCountingKit-8是由日本同仁研究所开发的一种细胞活性检测剂，相对于其他检测剂来说，使用方便，无需有机溶剂和放射性同位素，灵敏度高，重复性好，结果准确，但价格昂贵。目前，国内对CellCountingKit-8的合成研究较少。
CellCountingKit-8主要含有WST-8和1-甲氧基PMS两种成分，二者市售价格很高。其中，WST-8是一种水溶性三苯基四氮唑盐，四氮唑盐的合成方法有很多种，存在后处理困难、氧化剂毒性大、收率低等问题。1-甲氧基PMS是一种吩嗪硫酸二甲酯盐，其合成的关键在于吩嗪母核的合成。吩嗪母核的合成方法很多，但也存在副产物多、条件苛刻、收率低等问题，一般不适合工业化大生产。
本论文主要针对CellCountingKit-8的合成工艺进行了系统的研究，并尝试利用自制的WST-8与1-甲氧基PMS配制成一种新的用于细胞活性检测的生物试剂，具体研究内容如下:
一、对细胞活性检测剂的种类、优缺点做了文献调研并总结。
二、对CellCountingKit-8的研究价值、四氮唑盐的特点与合成方法、吩嗪类化合物的特点与合成方法进行了文献调研并总结。
三、考察了WST-8的合成方法，进行了路线设计、合成并对其反应条件进行了优化选择。我们找到了一条后处理简单、氧化安全、易于操作、成本较低的反应路线。
四、考察了1-甲氧基PMS的合成方法，进行了路线设计、合成并对其反应条件进行优化。我们找到了一条原料价廉易得、氧化效率高、操作简便、安全的反应路线。
五、利用紫外可见全波长扫描、高效液相方法，分别找到一种适合WST-8与1-甲氧基PMS含量测定的方法，并验证其专属性、精密度、稳定性。依此，我们有希望在配制成新的试剂后，确定其有效使用时间及最佳贮存条件。
六、将自制的WST-8与1-甲氧基PMS按一定比例配制成试剂，做细胞活性实验，同时以市售CellCountingKit-8为对照品，结果发现效果很好，这为将来研制出一种成本低但效果好的可用于细胞活性检测的生物试剂奠定了基础。
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