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鸡传染性支气管炎是由冠状病毒属传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus,简称IBV)引起的高度接触性传染病。此病在世界各地均有发生,给全球养禽业造成巨大的经济损失。传染性支气管炎病毒血清型较多且抗原易发生变异,给该病的诊断和防治造成了困难。S1蛋白是IBV主要的免疫原蛋白,能介导细胞融合,刺激机体产生病毒中和抗体和血凝抑制抗体,S1蛋白基因具有较强的型特异性,并且很容易发生变异,使IBV不断的出现新的血清型。另一个结构蛋白为小囊膜蛋白(E蛋白),它在IBV病毒的复制、病毒粒子的组装、释放等过程中起到重要作用。为了解我国传支病毒流行与变异情况,探索IBV病毒E基因在大肠杆菌原核系统高效表达的方法及其蛋白的免疫生物学特性,进行了本研究。 分别使用pGM-T-easy载体和pGEM-T-easy载体克隆了5个IBV中国地方分离株的S1基因和7个IBV中国地方分离株的E基因并进行了测序。应用生物学软件将所测S1基因序列和E基因序列与GenBank中登录的下相关序列进行了比较,绘制了它们的系统进化树。序列分析结果表明,S1基因和E基因存在着不同程度的较大变异,S1主要集中在69～81和142～150氨基酸处,E基因主要在11～17和87～96位氨基酸之间变化较大。进化树分析显示,所有分离毒株与参考肾型毒株有较近的亲缘关系,中国地方分离株形成了一个进化分支,从而说明AIBV病毒的发生和进化与地域有一定的相关性。 成功构建了pET32a(+)-IBVE表达载体,并在BL21(DE3)plysS大肠杆菌中经IPTG诱导得到高效表达,其表达产物用SDS-PAGE和Western blotting进行检测,蛋白的可溶性分析表明该融合蛋白以可溶性形式存在。 本研究中S1基因和E基因的序列分析为IBV流行病学的研究提供了依据,重组融合蛋白在大肠杆菌中的初步表达为进一步大量制备、纯化可溶性E蛋白,研究其生物学功能奠定基础。