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第一部分原发性肝癌解剖性切除的分析研究背景与目的:患者术前的肝功能水平,以及肝硬化与否无论对患者的手术决策,甚至远期预后均有不可忽视的影响。解剖性肝切除的概念自提出以来,受到了广泛的重视与争议,目前对于解剖性肝切除与非解剖性肝切除的远期预后差异已有较多研究,而对不同情况的患者如何选择手术方案,以及解剖性肝切除对患者围手术期结局,包括术中出血、术后并发症等的影响,以及有无肝硬化的患者在不同手术方式后临床结局的差异的研究仍有较大争议。因此本研究将集中于描述回顾本中心的原发性肝癌患者的病历资料,选择符合纳入条件的病例,针对解剖性肝切除与非解剖性肝切除患者进行一项描述性分析,探索行解剖性肝切除可能的危险因素。旨在提供基于本中心的原发性肝癌手术的描述性分析结果与初步评价。方法:该研究收集了从2013年1月至2018年12月共计521例行原发性肝癌切除手术的患者的一般资料、实验室检验结果、手术资料及病理结果。按照肝癌切除方式,分为解剖性肝切组(197例)与非解剖性肝切组(324例)。首先对所有患者的术前一般情况进行资料收集与统计描述,并采用单因素及多因素Logistic回归分析筛选行解剖性肝切除的独立危险因素。并分析两组的围手术期临床结局差异及进行亚组分析。所有数据资料均使用SPSS 22.0软件进行统计学分析,以P值<0.05为差异有显著统计学意义。结果:纳入本研究的解剖性肝切除组197例,非解剖性肝切除组324例。解剖性肝切除的单因素及多因素Logistic分析显示,年龄(OR=0.967,95%CI:0.946-0.990,P=0.004)是解剖性肝切除的保护性因素。而凝血酶原时间活动度(OR=1.023,95%CI:1.007-1.040,P=0.004)、CA199(OR=1.000,95%CI:1.000-1.001,P=0.032)、肿瘤最大径(OR=1.166,95%CI:1.086-1.252,P<0.001)及有无门静脉癌栓(OR=2.169,95%CI:1.156-4.070,P<0.001)是解剖性肝切除的危险性因素。围手术期结局分析显示,解剖性肝切除组相对于非解剖性肝切除组,会导致更多的手术出血量,需要更长的手术时间,术后需要进入ICU的可能性更高,ICU观察时间更长,且住院花费更高。在亚组分析中,仅对于肝硬化的患者,解剖性肝切除相对于非解剖性性肝切除,会导致更多的手术出血量,需要更长的手术时间,术后需要进入ICU的可能性更高,ICU观察时间更长,住院花费更高,且术后腹腔引流管留置时间更长。结论:解剖性肝切除组患者与非解剖性肝切除组患者在年龄、胆道指标如碱性磷酸酶等、肿瘤指标如CA199等、肿瘤最大径、门静脉癌栓与否及Child分级等方面均有显著差异,同时对于肝硬化的患者,解剖性肝切除可能会导致较差的围手术期结局,需酌情考虑患者术前情况,尽量避免行解剖性肝切除。第二部分:术前指标对原发性肝癌的生存预后研究背景与目的:原发性肝癌手术切除后的预后仍不容乐观,其5年总体生存率预计在50%左右,而5年的复发率则达到了70%以上,因此找到可能影响肝癌发生与转移的因素,探究其对肝癌预后的预测价值,具有重要的意义。从患者的术前指标尤其是肿瘤相关炎症指标中找寻预测肝癌预后的因素,是一个重要的方向。在本研究中,我们将收集原发性肝癌的各项术前指标,旨在进行一项生存预后分析,探寻其中的独立预测因子。方法:本研究收集了从2013年1月至2014年12月行原发性肝癌切除手术的患者共170例,对所有患者进行随访、筛选,运用单因素及多因素Cox回归分析探究不同术前指标对患者远期生存的影响。使用Kaplan-Meier法绘制不同的术前指标患者的远期总体生存曲线与无复发生存曲线,比较中性粒细胞/淋巴细胞比值(Neutrophil to Lymphocyte ratio,NLR)、淋巴细胞/单核细胞比值(Lymphocyte to monocyte ratio,LMR)及营养预后指数(Prognostic nutritional index,PNI)等炎症模型对原发性肝癌患者远期预后的影响,筛选出终点事件的独立预测因子。所有数据资料均使用使用SPSS 22.0软件进行统计学分析,以P值<0.05为差异有显著统计学意义。结果:对于单个术前指标的单因素及多因素Cox回归分析显示,对于原发性肝癌队列总体生存预后,α-L-岩藻糖苷酶(HR=1.022,95%CI:1.009-1.036,P=0.001)及肿瘤直径(HR=2.123,95%CI:1.172-3.848,P=0.013)是终点事件的危险性因素;对于无复发生存预后,α-L-岩藻糖苷酶(HR=1.034,95%CI:1.020-1.047,P<0.001)及肝内播散(HR=1.860,95%CI:1.105-3.132,P=0.020)是终点事件的危险性因素,凝血酶原时间(HR=0.948,95%CI:0.910-0.987,P=0.010)是终点事件的保护性因素。高AFU组(>35U/L)相对于低AFU(≤35U/L)组,其远期总体生存预后(P<0.001)与无复发生存预后(P=0.003)均显著较差。此外,LMR模型对原发性肝癌患者的无复发生存预后(HR=0.593,95%CI:0.353-0.996,P=0.048)有较好的预测价值。LMR越高,即外周血中淋巴细胞与单核细胞的比值越高,患者的无复发生存预后越好。结论:在各类术前指标中,α-L-岩藻糖苷酶(AFU)对原发性肝癌患者总体生存预后与无复发生存预后均有较好的预测作用,AFU较高(>35U/L)的患者术后远期总体生存率和无复发生存率均较低。在各类炎症模型中,LMR模型对原发性肝癌患者的无复发生存预后有较好的预测价值。第三部分LIGHT通过促进凋亡抑制肝癌细胞系LM3增殖的研究背景与目的:T细胞为肿瘤微环境中的免疫细胞之一,也是发挥杀伤肿瘤效应的主要细胞。LIGHT是淋巴毒素β的同源分子,表达于T细胞、NK细胞等免疫细胞。LIGHT在肿瘤微环境中可能通过直接或间接的途径,并主要由LTβR受体介导发挥了抗肿瘤的作用。目前LIGHT与肝癌增殖的相互关系仍研究较少,LIGHT在肝癌细胞的免疫杀伤作用中发挥的功能具有一定研究价值。方法:利用生物信息学方法比较肝癌组织与癌旁组织之间LIGHT的表达差异。利用慢病毒(Lentivirus)载体在肝癌细胞系LM3中过表达LIGHT蛋白,使用PCR、免疫荧光等方法验证其表达,利用CCK8、克隆形成实验等探究其对LM3增殖的影响,利用流式细胞术探究其对LM3的凋亡及细胞周期是否存在影响,利用Western-blot等方法探究LIGHT在LM3内发挥作用的可能机制。所有数据资料均使用SPSS 22.0软件进行统计学分析,以P值<0.05为差异有显著统计学意义。结果:LIGHT在肝癌组织中的表达显著低于癌旁组织。在不同肝癌细胞系中,LM3细胞系的LTβR表达量最高,而HVEM表达量相对较低。PCR及免疫荧光结果验证了LIGHT在LM3细胞内的过表达。在LM3细胞中过表达LIGHT显著抑制了细胞增殖,且促进了细胞凋亡的发生,但对细胞周期无明显影响。进一步的机制研究显示LIGHT一定程度上可能影响了LM3细胞内的非经典NF-κB通路,且可能通过激活Erk信号通路,并通过外源性凋亡信号通路促进了LM3细胞的凋亡。结论:肝癌组织中LIGHT的表达量低于癌旁组织。在肝癌细胞系LM3中过表达LIGHT可能影响非经典NF-κB通路并通过促进细胞凋亡而抑制其增殖。