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金黄色葡萄球菌是世界性存在的能够感染人与动物的病原菌。在人类能通过感染引起坏死性肺炎、化脓性关节炎以及败血症等,在养殖业上还能感染鸡、牛和家兔等。为探讨四川部分区域家兔源金黄色葡萄球菌毒力基因携带率、基因型差异及亲缘关系的情况。本试验在对四川部分区域41株家兔源金黄色葡萄球菌特异性鉴定femB基因和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MRSA和MSSA筛选的基础上,通过PCR法检测13种常见的毒力基因,并应用MLST和PFGE两种分子分型方法研究四川部分区域金黄色葡萄球菌基因型差异与亲缘关系。结果显示,41株兔源金黄色葡萄球菌在LB固体培养基37℃恒温培养24 h后,均可形成表面光滑、厚、圆形隆起、湿润、边缘整齐的菌落。革兰氏染色镜检为球形,成双或成葡萄串状排列的G~+球菌。41株兔源金黄色葡萄球菌femB基因PCR鉴定结果显示均可扩增出约651 bp的特异性条带,结合形态学与PCR检测结果41株菌株均为金黄色葡萄球菌。同时,mecA基因扩增结果显示,41株金黄色葡萄球菌中共31株耐药基因mecA阳性,确认为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),检出率为75.61%。合成13个常见的毒力基因的引物(sea、seb、sec、sed、see、hla、hlb、TSST-1、eta、etb、clfA、nuc、PVL),以41株兔源金黄色葡萄球菌的基因组DNA为模板,采用PCR法特异性扩增,根据扩增基因组特异性条带的大小鉴定菌株的毒力基因携带情况。电泳图谱鉴定结果显示,此次试验共检测出sea、sec、see、hla、hlb、eta、clfA、nuc、PVL 9种毒力基因,但seb、sed、TSST-1和etb基因未检测出。且结果显示,nuc、eta、clfA和hla在MSSA和MRSA菌株中的阳性检出率相同,均为100.0%。sea、sec、see、hlb和PVL在MSSA菌株的阳性检出率分别为20.0%、90.0%、80.0%、100.0%和20.0%,在MRSA菌株的阳性检出率分别为6.5%、83.9%、80.6%、87.1%和3.2%,在41株菌株的阳性检出率共计分别为9.7%、85.4%、80.5%、90.2%和7.3%。可以看出MSSA菌株保持了相当高的毒力,而MRSA菌株的毒力稍弱。绝大部分菌株(90.2%)均同时携带2种溶血素基因(hla、hlb)。其中自贡和乐山的菌株毒力基因检出的种类最多,共9种;而南充、德阳、成都和眉山的菌株检测出的毒力基因有7种。选取金黄色葡萄球菌的7个管家基因:arcC、aroE、glpF、gmk、pta、tpi、yqi进行MLST分型,以41株家兔源金黄色葡萄球菌的基因组DNA为模板,采用PCR法进行特异性扩增与测序后,在MLST数据库(http://pubmlst.org)中进行比对确定其序列型。结果显示,41株菌株MLST分型共获得2个STs序列型(ST-398、ST-3320)和1个克隆群CC-398,其中ST-3320是ST-398的克隆衍生物,ST-3320和ST-398只存在单一位点的差异。ST-398为本次试验菌株中的优势序列型,占97.6%。只有分离自乐山的N04菌株为ST-3320,其余区域的菌株序列型均为ST-398;其中10株MSSA菌株均属于序列型ST-398,31株MRSA菌株中30株属于序列型ST-398,只有1株为序列型ST-3320,但MSSA菌株和MRSA菌株均归属于克隆群CC-398。将41株菌株包埋在胶块,经蛋白酶K和细胞裂解液作用后释放基因组DNA,并用50U的Sma I限制性内切酶进行酶切30min后,置于电流交替变换的电泳槽中电泳16 h后,凝胶成像系统成像,Quantity One软件进行聚类分析。结果显示,PFGE聚类分析可分为18个PFGE带型(cluster A-R),其中有8个带型的只包含单一菌株的谱型(cluster B、E、G、I、J、K、N、Q),其余带型均以77%以上的相似性聚类。有8个带型中包含的金黄色葡萄球菌分离来自四川不同区域(cluster D、F、H、L、M、O、P、R)。只有cluster A和cluster C含有的菌株均分离于同一区域(自贡)。在相似性聚类上,只有cluster O、P同时包含MSSA菌株和MRSA菌株。本次试验发现四川部分区域家兔源金黄色葡萄球菌之间毒力因子携带情况差异较小,但毒力基因检出率均较高,其致家兔感染发病的几率较大;PFGE和MLST两种基因分型结果较为一致,即四川部分区域金黄色葡萄球菌的主要流行菌株遗传变异程度小,菌株间亲缘关系较近。