基于16S rDNA测序技术分析罗伊氏乳杆菌对猪背膘厚度的影响

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肠道作为体内最大的生物反应器包含了种类繁多且数量庞大的微生物群落,并且不同的微生物之间具有复杂的相互作用关系,其种类和数量的变化不仅会影响宿主的健康导致各种疾病的发生,而且与宿主的生长发育也密切相关。为更好地了解肠道微生物的生物学功能以及肠道微生物种类和数量的变化对猪生长发育尤其是背膘厚度的影响,本研究将二元后备母猪按照背膘厚度分为低背膘组(背膘厚度在7~13 mm)、中背膘组(背膘厚度在13~19 mm)和高背膘组(背膘厚度在19~23 mm),利用16S rDNA测序技术筛选不同背膘组之间肠道的差异菌群并结合其生物学功能分析,确定与猪背膘厚度相关性较高的罗伊氏乳杆菌并对其体外培养条件进行优化,进一步分析验证罗伊氏乳杆菌对梅山猪生长发育尤其是背膘厚度的影响。主要试验结果如下:1.使用16S rDNA高变区测序技术对不同背膘组粪便样本中的菌群种类和相对丰度进行检测,并依次进行差异物种分析、α和β多样性分析以及功能分析等,以此筛选出不同分组之间的差异物种和差异功能通路,从而分析肠道微生物与猪的生长发育之间所具有的内在联系。结果显示,共筛选到罗伊氏乳杆菌和普雷沃氏菌等多种差异菌种以及花生四烯酸和精氨酸代谢等差异功能通路,差异菌种和差异功能之间存在内在的相关性。结合差异物种和功能通路的综合分析发现,罗伊氏乳杆菌可能是影响后备母猪背膘厚度的主要菌种,并且在一定程度上背膘厚度与其相对丰度成负相关。2.根据上述的综合分析之后选择罗伊氏乳杆菌作为动物实验的饲喂菌种,并对其所需的体外培养条件进行相应的优化,分别比较不同的培养温度(35℃、37℃、39℃、41℃和43℃)、气体条件(无氧、微氧和无氧供二氧化碳)、转速(0 r/min、60 r/min、120 r/min、180 r/min 和 240 r/min)、接种量(1%、2%、3%、4%、5%、6%)和温度(12 h、24 h、36 h和48 h)条件下罗伊氏乳杆菌的生长差异,确定其最佳培养条件为在无氧且供给二氧化碳的情况下按照3%的接种量以41℃的培养温度和60 r/min的培养转数下培养36 h。3.通过体外培养得到足够数量的罗伊氏乳杆菌之后进行动物饲喂实验,首先将36头35日龄的梅山仔猪随机分为对照组(基础饲粮)和实验组(基础饲粮+罗伊氏乳杆菌)每组各18头,之后实验组按照5×1010 CFU/kg的标准在基础饲粮中均匀混合罗伊氏乳杆菌菌粉连续饲喂10天,其后换为基础饲粮,直至180日龄。实验期为145天,至180日龄时结束并对试验结果进行统计分析。结果显示,在35-70日龄时实验组平均日增重370 g,对照组平均日增重290 g,两组之间相差80 g,实验组显著高于对照组(P<0.05)。此外,实验组料重比为2.31,对照组料重比为3.09,两组之间相差0.78,实验组显著低于对照组(P<0.05)。在180日龄时实验组终期平均增重比对照组高出4.44 kg,而平均背膘厚度比对照组低了 2.84 mm,虽均未达到显著性水平(P>0.05),但在生产中具有重要的应用前景。上述试验结果表明,罗伊氏乳杆菌可以影响育肥梅山猪的背膘厚度以及平均日增重和料重比等生产指标,并且罗伊氏乳杆菌在梅山猪的不同生长阶段所起到的作用是不同的,在保育阶段主要是促进梅山猪的快速生长发育,而在育肥阶段的中后期则是以降低脂肪的过度沉积和增加体重为主。本研究结果可以为后续更深入地探究罗伊氏乳杆菌对猪生长发育的作用机制奠定基础,并能够为益生菌种的筛选及相关益生菌制剂的开发提供依据。
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