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肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)严重危害我国人民健康,目前,肝癌治疗效果并不显著,缺乏有效的治疗手段及药物,深入研究其发生发展机制将为肝癌治疗提供有效的理论依据和治疗指导。HCC的发生发展机制在转录水平、转录后水平、翻译水平和翻译后水平等不同层次均有揭示。其中,长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)与癌症之间的关系是近年来的研究热点。已有大量报道表明长链非编码RNA MALAT1(Metastasis associated lung adenocarcinoma transcript1)在肺癌、结肠癌、乳腺癌等多种肿瘤中异常表达,与肿瘤的发生发展、转移和及存活紧密相关,然而其在HCC中的具体作用以及相关机制尚待深入研究。本课题研究了MALAT1在HCC发生发展进程中的作用。统计分析TCGA临床HCC病人数据库表明,lncRNA MALAT1在癌组织样本中表达显著上调;RT-qPCR检测HCC病人癌及癌旁组织进一步证实MALAT1在HCC中表达上调,提示MALAT1可能在促进HCC发展进程中发挥作用。体外细胞功能实验表明,下调MALAT1表达对肝癌细胞系增殖、周期、侵袭和凋亡均有影响:肝癌细胞系QGY-7701和QGY-7703中转染MALAT1小干扰RNA或阴性对照RNA,之后加以细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激(模拟炎性刺激),细胞增殖实验结果表明,MALAT1干扰组肝癌细胞增殖比例较对照组明显减少;侵袭小室(Transwell)实验结果表明,MALAT1干扰处理后肝癌细胞侵袭能力显著降低;流式检测结果表明,MALAT1干扰后肝癌细胞处于G1期的比例显著上调、凋亡细胞比例明显增加。慢性炎症是肝癌发生发展的一大促进因素,与HCC紧密相关,进一步研究发现,干扰MALAT1显著下调LPS刺激后QGY-7701和QGY-7703肝癌细胞促炎因子IL-6和CXCL8的表达水平。与之相反,在下调MALAT1的肝癌细胞系中过表达MALAT1能够代偿MALAT1干扰所带来的炎性因子IL-6和CXCL8表达下调效应。通过蛋白质谱寻找MALAT1下游效应分子的机制研究表明,MALAT1能够与染色体重组复合物SWI/SNF的催化亚基BRG1结合,BRG1 RIP实验则证实了MALAT1的确可与BRG1相互作用。功能验证表明,BRG1 siRNA干扰同样下调肝癌细胞炎性因子IL-6和CXCL8的表达及分泌,与MALAT1干扰效应一致。CO-IP及CHIP结果进一步揭示,LPS刺激后,BRG1与P65可以相互作用,干扰BRG1可削弱P65与IL-6、CXCL8启动子区的结合。此外,本研究使用更接近临床表现的SMMC-LTNM荷瘤小鼠模型进行MALAT1体内功能研究。结果表明,瘤内注射胆固醇修饰的MALAT1干扰后,显著抑制荷瘤小鼠肿瘤增长。免疫组化结果显示,干扰处理组小鼠肿瘤增殖指标、侵袭指标和血管生成指标表达减少,凋亡指标表达增加,其血清AFP、IL6和CXCL8水平也明显下调,与体外结果一致。本研究表明在LPS刺激的QGY-7701和QGY-7703肝癌细胞系中,lncRNA MALAT1在肝癌组织与肝癌细胞中高表达,在炎症因子刺激下,MALAT1能够招募BRG1定位于IL-6和CXCL8的启动子区,协同P65诱导促炎因子IL-6和CXCL8转录,促进炎性反应,从而在HCC发生发展中起促进作用。本课题研究深入认识了lncRNA、炎性因子和HCC之间的密切关系,研究了MALAT1在促进HCC进程中的作用机制,为HCC临床治疗提供了潜在靶点。