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研究目的:通过TMT蛋白组学分析筛选出肌筋膜疼痛触发点(Myofascial Trigger Points,MTr Ps)大鼠脊髓差异蛋白,并对这些蛋白做GO功能注释及KEGG通路富集。根据GO功能注释和KEGG通路富集结果,筛选出与MTr Ps发病机制相关的信号通路,选择MTr Ps发病机制最相关的信号通路进行研究。通过Unpoit查找所选择研究的信号通路上的差异性蛋白的功能,探讨它们之间如何相互作用,导致大鼠腓肠肌形成MTr Ps。再通过蛋白质免疫印迹,观察针刺和假针刺干预后,筛选出的蛋白表达水平的变化,为针刺治疗触发点性疼痛的临床有效性提供理论依据。研究对象和方法:以SD大鼠为模型,实验设计4个组别,分别为CG组(空白对照组)和MG组(造模组),DG组(针刺组)和NDG组(假针刺组)。CG组和MG组各选10个大鼠脊髓样本做TMT相对定量蛋白质组学生物信息学分析,以倍数变化大于1.2倍(上调大于1.2倍或者下调小于0.83)且P value小于0.05的标准筛选出两组之间存在的差异性蛋白,再根据GO功能注释及KEGG信号通路分析结果相结合,筛选出与MTr Ps发病机制相关的生物学通道。然后通过Western Blot实验验证四组大鼠脊髓样本中,所筛选出的信号通路上的上调和或下调蛋白表达水平的变化,所获得的数据用SPSS 20.0软件,采用单因素方差分析的统计学方法进行分析。研究结果:1 iTRAQ实验结果本实验共鉴定SD大鼠脊髓样本中蛋白质5095个,最终筛选差异表达蛋白质,上调蛋白70个,下调蛋白58个,共128个。最后,根据研究目的以及GO功能注释和KEGG通路富集结果,选择差异性蛋白富集最显著的一条通路进一步研究,即ECM-受体之间的相互作用。该通路上差异性蛋白主要有血小板反应蛋白1(thrombospondin 1,THBS-1)、胶原蛋白,VI型,α(collagen,type VI,alpha,COL6A)、整合素β3(integrin beta 3,ITGβ3)和玻璃体结合蛋白(vitronectin,VN)。2蛋白质免疫印迹结果THBS-1、VN、ITGβ3、COL6A四个蛋白在MG组/CG组表达水平上升,组间差异非常显著(P<0.01)。与i TRAQ实验结果一致我们还发现针刺后COL6A蛋白表达水平较MTr Ps模型组显著下降(P<0.01),假针刺干预后表达上水平也下降(P<0.05)。假针刺干预MTr Ps,COL6A蛋白表达水平下降没有针刺干预后更显著。ITGβ3蛋白的DG组/MG组和NDG组/MG组表达量都显著下降(P<0.01)。VN蛋白的DG组/MG组下降显著(P<0.05),但DG组/MG组组间没有差异。THBS-1蛋白表达水平:DG组/MG组与NDG组/MG组组间都没有差异,但较MG组,DG组与NDG组的该蛋白表达水平均有下降的趋势。研究结论:1.大鼠脊髓内THBS-1、ITGβ3、COL6A和VN这四个蛋白表达水平上调,可能促进中枢神经元的分化以及神经元突触的发生和形成,尤其是兴奋性突触的增多,导致MTr Ps大鼠的中枢致敏。2.针刺可能通过降低MTr Ps大鼠脊髓上调的ITGβ3表达水平减轻中枢致敏。此外,准确定位骨骼肌上MTr Ps的位置行针刺比针刺触发点以外的骨骼肌处治疗效果更显著。