论文部分内容阅读
目的：探讨趋化因子配体21(CCL21)在骨癌痛大鼠脊髓的表达及其作用。 方法：第一部分：健康雌性SD大鼠42只，体重160～180g，采用随机数字表法，将大鼠随机分为7组(n=6)：正常组(naive组)、假手术组(sham组)、骨癌痛3天组(BCP3)、骨癌痛7天组(BCP7)、骨癌痛14天组(BCP14)、骨癌痛21天组(BCP21)、骨癌痛28天组(BCP28)。分别于术前1d，术后1、3、5、7、14、21、28d测定大鼠接种侧后肢的机械缩足反射阈值(PMWT)；采用苏木素一伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色法观察各组大鼠接种侧胫骨的病理变化；采用免疫印迹法检测各组大鼠脊髓CCL21的表达水平。 第二部分：健康雌性SD大鼠18只，体重160～180g，采用随机数字表法，将大鼠随机分为三组(n=6)：正常组(naive组)、假手术组(sham组)、骨癌痛组(BCP组)。分别于术前1d，术后1、3、5、7、14d测定大鼠接种侧后肢的机械缩足反射阈值(PMWT)，采用HE染色法观察各组大鼠接种侧胫骨的病理变化；采用免疫荧光技术观察各组大鼠脊髓CCL21的表达部位。 第三部分：健康雌性SD大鼠56只，体重160～180g，采用随机数字表法，将其随机分为7组(n=8)：假手术组(Ⅰ组)、假手术+溶媒PBS组(Ⅱ组)、假手术+CCL21中和抗体组(Ⅲ组)、骨癌痛组(Ⅳ组)、骨癌痛+溶媒PBS组(Ⅴ组)、骨癌痛+对照IgG组(Ⅵ组)和骨癌痛+CCL21中和抗体组(Ⅶ组)。Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅵ组和Ⅶ组采用胫骨骨髓腔内注射Walker-256乳腺癌细胞制备胫骨癌痛模型，Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组骨髓腔内注射等体积生理盐水，各组于建模后第14天观察大鼠胫骨的影像学表现。其中Ⅴ组、Ⅵ组和Ⅶ组于注射Walker-256乳腺癌细胞后第14天经L5～6蛛网膜下腔分别注射溶媒。PBS15μl、亲和纯化的正常羊IgG10μg/15μl和CCL21中和抗体组10μg/15μl；Ⅱ组和Ⅲ组于相同时点经L5～6蛛网膜下腔分别注射溶媒PBS15μl、CCL21中和抗体组10μg/15μl。于注射Walker-256乳腺癌细胞或生理盐水前1d(Z0，即基础值)、注射Walker-256乳腺癌细胞或生理盐水后1、3、5、7、14d(Z1-5)及给药后0.5、1、2、4、8、12、24、48h(T1-8)时测定大鼠接种侧后肢的机械缩足反射阈值(PMWT)。 结果：(1)疼痛行为学：造模后第7、14、21、28天，骨癌痛大鼠接种侧后肢PMWT降低(P<0.05)；病理学表现：造模后第7、14、21、28天，骨癌痛大鼠接科侧胫骨可见明显的骨结构破坏；免疫印迹：与假手术组相比，骨癌痛7、14、21、28d组脊髓CCL21表达上调(P<0.05)。(2)疼痛行为学：造模后第7、14天，骨癌痛大鼠接种侧后肢PMWT降低(P<0.05)；病理学表现：造模后第14天，骨癌痛大鼠接种侧胫骨可见明显的骨结构破坏；免疫荧光染色法：CCL21与癌细胞接种后肢同侧的脊髓背角神经元存在共表达。(3)影像学表现：建模后第14天，骨癌痛大鼠接种侧胫骨可见明显骨结构破坏；疼痛行为学：与Ⅰ组比较，Ⅱ组和Ⅲ组PMWT差异无统计学意义(P>0.05)；骨癌痛各组(Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和Ⅶ组)大鼠PMWT在术后第7天下降(P<0.05，P<0.01)。与Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组比较，Ⅶ组大鼠在鞘内给药后2hPMWT升高(P<0.05)，在8h达到峰值(P<0.01)；与Ⅳ、Ⅴ组比较，Ⅵ组鞘内给药后PMWT差异无统计学意义(P>0.05)。 结论：1.胫骨癌痛大鼠脊髓水平CCL21表达量上调。2.CCL21在脊髓背角表达于神经元。3.鞘内注射CCL21中和抗体，能够减轻胫骨癌痛大鼠已产生的痛觉过敏。提示趋化因子CCL21参与大鼠胫骨癌痛的产生和维持，并且可能通过脊髓背角的神经元在这个过程中发挥作用。