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研究背景:肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)是由多种原因引起的严重肺间质慢性疾病。其发生的主要病理特点是早期以下呼吸道急性炎症反应为主,包括肺泡炎、间质性肺炎、肺泡上皮受损、巨噬细胞、中性粒细胞等炎性细胞浸润,并伴随着大量成纤维细胞和肌成纤维细胞病理性增生转型,导致后期细胞外基质(extracellular matrixReal-time,ECM)成分在肺泡和间质内沉积,纤维组织过度修复造成肺组织结构的紊乱取代正常的肺组织结构,其实质为肺泡损伤、胶原沉积,最终导致肺纤维化。其临床主要表现为进行性呼吸困难、喘息、气短、咳嗽咯痰,以限制性通气功能障碍,低氧血症为主,最终导致呼吸衰竭,是呼吸系统最严重疾病之。随着诸多生命科学理论研究,实验手段的多样化,中医药研究者从器官、组织、细胞、分子层次,对肺纤维化的机制的深入研究,并取得极大的进展。相关研究显示肺纤维化是由与早期组织损伤、炎症变化发展而来,而肺部受感染或损伤后,肺泡上皮细胞是最早受到损伤的靶细胞。并且最初肺损伤后发生于组织修复时的肺泡Ⅱ型上皮细胞向间质细胞转化(epithelialt to mesenchymaltransiti,EMT)在肺纤维化发生发展过程中发挥着极其重要的作用。近年来随着对肺纤维化的发病机理的深入研究,本团队在长期的临床实践中,依照临床经验创立的化纤系列方,其水煎剂对肺纤维化患者有一定的疗效。本课题中我们主要研究“气阴两虚,瘀血阻滞”化纤方对EMT径关键蛋白基因E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)、α-平滑肌蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、波形蛋白(vimentin)表达的影响,在分子水平上探讨该方药不同拟方对博来霉素肺纤维化大鼠的影响,以及这两方对该动物模型在该治疗时间的效用。 目的:通过观察博来霉素经典肺纤维化大鼠模型在中药治疗疗程中E-钙黏蛋白、α-平滑肌蛋白、波形蛋白表达的变化,在分子水平上探讨“气阴两虚,瘀血阻滞”化纤系列方化纤A方(HA)、化纤B方(HB)对博来霉素肺纤维化大鼠的影响。方法:3月龄SPF级健康SD大鼠72只,体重180±20g,雌雄各半。随机组与模型组并造模,造模后第2天开始治疗,连续28d。观察各组动物一般情况,于造模第7、11、23、28天,分别选取模型组对应时间点组大鼠;其余各组于治疗28天后取样。称重,股动脉取血,观察肺叶表观改变。左肺组于10%中性甲醛固定,HE、Masson染色后行肺泡炎分级评分和肺纤维化分级评分。右肺组织用于进行QPCR检测E-cadherin mRNA、α-SMA mRNA、vimentin mRNA的表达。采用spss19.0对数据进行统计学分析。 结果:肺系数:B28组肺系数显著大于P、HA、HB组(P<0.01)。病理学观察:造模后大鼠肺组织在第7天时肺泡炎症细胞充斥肺间质,肺间质增宽。第11天炎症细胞减少但伴有出血点出现,第23天肺间质炎症减轻,散在出血点减少,并伴随胶原沉积。第28天可见大量胶原蛋白沉积,肺纤维化初期主要以肺泡炎为主,后期以纤维化为主。相关基因的表达:B、P、HA、HB组大鼠肺组织中的E-cad基因表达下调,而与HB组的E-cad的mRNA表达量均值均大于模型组且有统计学差异(P<0.05),HA组与HB组的E-cad的mRNA表达量有统计学差异(P<0.05)。B28、HB的α-SAM的mRNA表达量出现统计学差异(P<0.05),HA与HB的α-SAM的mRNA表达量具备统计学差异(P<0.01)。HB的vimentinm的mRNA表达的上调量显著低于B28(P<0.05),HA与HB的α-SAM的mRNA表达量有显著差异(P<0.05),且HB的vimentinm的mRNA表达量低于HA。 结论:1化纤A方(HA)与化纤B方(HB)对博来霉素致大鼠肺纤维化模型的肺泡炎和肺纤维化有一定疗效。2化纤B方对肺纤维化作用机制可能与α-SMA、vimentin、E-cad表达变化有关即延缓EMT发展过程。3博来霉素致经典肺纤维化大鼠动物模型适应用于“气阴两虚,瘀血阻滞”型肺纤维化的证型研究,该结果显示化纤B方更适用于该症。