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目的：1.检测65例初诊急性B淋巴细胞白血病及19例染色体核型分析为9p13异常患者中PAX5基因重排的发生率，并分析其临床特点及实验室特征。2.从一例伴dic(7;9)(p11-13;p13)的混合表型急性白血病的研究入手，定位克隆PAX5的新对手基因及融合基因，并对其新融合基因进行初步功能研究，以深化我们对PAX5相关融合基因致白血病发生、发展机制的认识。3.分析BCR/ABL1阳性急性白血病中BTG1基因缺失的发生情况，阐述伴有BTG1基因缺失的BCR/ABL1阳性急性白血病的临床及实验室特征,初步探讨BTG1缺失与BCR/ABL1阳性急性白血病的发病及复发的相关性。方法：1.通过R显带技术对84例患者骨髓标本进行核型分析，并选用位于9p13PAX5基因两端的RP11-344B23和RP11-652D9克隆，常规抽提DNA,采用缺口平移法标记荧光素，应用荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）对65例B-ALL及19例伴有abn(9p)异常的患者进行PAX5基因重排或缺失筛选，并分析其临床及实验室特征。2.收集7例伴有dic(7;9)的患者骨髓标本，其中4例应用DNA抽提试剂盒（Invitrogen公司生产）抽提基因组DNA，各自送检至少1.5ug DNA于上海伯豪生物技术有限公司，选用安捷伦人类比较基因组芯片（Agligent Technologies,SantaClara,CA,USA,244K）对4例患者进行Array-CGH技术检测，同时应用送检公司所提供的软件（Agilent Genomic Workbench Lite Edition6.5software）进行数据与图像的分析，明确7号和9号染色体的重排情况；利用RT-PCR验证易位中PAX5新对手基因（位于7p13的UBE2D4基因）；设计引物并利用KOD高保真酶扩增出PAX5-UBE2D4融合基因全长，根据后续功能研究的需要分别将PAX5-UBE2D4及BCR/ABL两个融合基因全长克隆到慢病毒载体LV5。采用慢病毒包装体系包装PAX5-UBE2D4及BCR/ABL病毒，并用病毒侵染NIH-3T3细胞及小鼠原B细胞BaF3细胞株，成功构建过表达PAX5-UBE2D4、BCR/ABL、PAX5-UBE2D4+BCR/ABL三种稳转细胞株，通过Western Blot验证蛋白表达情况，绘制生长曲线、甲基纤维素集落形成实验、实时定量PCR等情况观察这些对NIH-3T3及BaF3细胞的恶性转化能力。3.收集2001-2013年期间在苏州大学附属第一医院住院诊断和治疗的BCR/ABL1阳性急性白血病44例，选用安捷伦人类比较基因组芯片对22例患者进行Array-CGH技术检测，并对这44例患者的骨髓标本mRNA，利用RT-PCR精确定位BTG1基因缺失位点，并总结BTG1缺失组患者的临床及实验室特征，分析其与发病机制及复发的相关性。结果：1.伴随9p13/PAX5重排患者的临床及实验室特征65例B-ALL及19例9p13异常患者中PAX5基因缺失的有20例（23.8%），PAX5基因易位的有2例（2.4%），PAX5基因扩增1例（1.2%），总的异常率为27.4%（23/84）。伴有t(9;22)的PAX5基因重排阳性率高于不伴有t(9;22)的PAX5基因重排率，PAX5基因重排在不同性别、年龄及不同白细胞、血红蛋白及血小板水平，差异均无统计学差异（P值均>0.05）。2.PAX5-UBE2D4融合基因的克隆及功能研究应用FISH技术、比较基因组杂交芯片、RT-PCR和基因测序技术对其中1例患者白血病细胞dic(7;9)(p11-13;p13)的断裂点进行精确定位，克隆到一个新的累及PAX5和泛素结合酶UBE2D4的融合基因，PAX5-UBE2D4。该融合基因由PAX5的1-7号外显子和UBE2D4的2-7号外显子融合而成，且UBE2D4基因的开放阅读框出现移码后提前终止。通过分子克隆及细胞培养技术，利用携带PAX5-UBE2D4及BCR/ABL慢病毒载体的质粒转染NIH-3T3细胞及BaF3细胞，对其生物学特性进行检测后发现，PAX5-UBE2D4能促进细胞的生长，且能在甲基纤维素半固体培养基形成集落，同时PAX5-UBE2D4可使BaF3细胞减少对IL-3的依赖。Western Blot结果显示，PAX5-UBE2D4融合蛋白主要表达在细胞核，在细胞浆可少量表达，融合蛋白大小约55KDa。通过定量PCR检测PAX5的表达，感染组细胞均表现为PAX5高表达。3.BTG1基因缺失在Ph阳性急性白血病中的发生率及作用在44例初治的BCR/ABL1阳性急性白血病中，共有14例患者出现BTG1缺失（14/39，31.8%），包括10例BCR/ABL1阳性的急性B淋巴细胞白血病（10/32，31.3%），2例混合表型急性白血病（2/6，33.3%），2例慢性粒细胞白血病急变期（2/6，100%）。在此研究中，共精确定位5种BTG1缺失断裂位点，从第284个至第304个碱基，横跨20个碱基对，形成截短型BTG1转录本。在BTG1缺失型及野生型患者相比较，两组在外周血WBC计数、Hb水平、PLT计数、骨髓原始细胞比例、性别、年龄及化疗的总体缓解率方面的差异均无统计学意义。结论：1.本实验通过对急性B淋巴细胞白血病中PAX5基因异常进行FISH筛选，发现PAX5基因异常是急性B淋巴细胞白血病中最常见的一类遗传学异常，还可见于AML-M2，同时常伴随常见的再现性遗传学异常，如t(9;22)(q34;q11)，在B细胞的发育分化及增殖过程起协同作用，诱发B-ALL的发生发展。2.发现一种累及PAX5基因的新获得性染色体易位：dic(7;9)(p11-13;p13)。该易位基因组水平的断裂点分别位于PAX5第7内含子及UBE2D4第1内含子之间。与野生型PAX5蛋白一样，PAX5-UBE2D4的融合蛋白位于细胞核内，对PAX5的转录活性可能有一定影响，PAX5-UBE2D4融合蛋白能使BaF3细胞获得增殖优势，协同表达的BCR/ABL蛋白可抑制细胞的粘附和凋亡，促使细胞不依赖于细胞生长因子而过度增殖。3.BTG1基因缺失在BCR/ABL1阳性急性白血病中的发生率可达33.3%，高于国外报道，本研究首次发现在MPAL及CML-BC（B系）中也存在BTG1基因缺失。BTG1基因缺失可能在BCR/ABL1阳性急性白血病的发病及复发过程中扮演一个很重要的角色。