第一部分儿童尘螨过敏性哮喘患者登记研究数据库的构建研究背景:哮喘是一种异质性疾病,因其不同的临床特征（表型）及病理生理机制（内表型）产生了对药物不同的治疗反应。尘螨过敏性哮喘是儿童最常见的哮喘类型。与随机对照试验（Randomized controlled trial,RCT）相比,患者登记研究（Patient registry study,PRS）能更全面地反映哮喘患儿的真实身体状况、临床诊断和治疗过程。目的:建立儿童尘螨过敏性哮喘患者登记研究数据库,对不同临床表型的患儿进行聚类分析,并利用数据库中的临床血样,进一步研究引起不同临床表型的病理生理机制,了解患儿对治疗产生不同反应的原因,为患儿提供更有靶向性,更个体化的治疗方案。方法:按照患者登记研究数据库的方法来构建儿童尘螨过敏性哮喘患者登记研究数据库。纳入从2018年8月至2021年2月就诊于我院哮喘专科门诊,符合纳入标准并同意参加研究的患儿。在患儿监护人签署知情同意书后收集患儿临床资料、实验室检查和采集外周血样本。外周血样本进一步提取血清、血浆、外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells,PBMC）。血清检测IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ等常见的炎症因子。其余未用全血、血清、血浆、PBMC冻存于实验室-80℃冰箱或医院生物样本中心。结果:目前数据库中共收集259名患儿的临床数据及血液样本,其中男女比例为164:95。54.83%的患儿存在过敏性疾病家族史,48.26%的患儿有被动吸烟史,69.88%的患儿出生方式为剖宫产。患儿总IgE（t IgE）中位数为469.00Ku/L,粉尘螨特异性IgE与总IgE比例（s IgE/t IgE）中位数和户尘螨s IgE/t IgE中位数分别为11.77%和14.00%,嗜酸性粒细胞百分比（E%）中位数为7%,均高于正常值。根据治疗后c-ACT评分将患儿分为哮喘控制组与未控制组,初步比较治疗后两组间各指标发现未控制组患儿的t IgE、E%、Fe NO、Hb均高于控制组,而FEV1%、IL-17低于控制组。结论:我们已经初步建立起儿童尘螨过敏性哮喘病例注册研究数据库,未来会进一步对数据库进行完善及扩大样本量。通过对数据库中患儿进行聚类分析,并利用储存的临床血样,我们可以进一步研究不同患儿的病理生理机制及对治疗产生不同反应的原因,为患儿提供更个体化、更有靶向性的治疗。第二部分儿童尘螨过敏性哮喘患者登记研究数据库应用第一节FLNA在过敏性哮喘及对ICS治疗反应中的作用研究研究背景:呼出气一氧化氮（Fraction exhaled nitric oxide,Fe NO）能够准确的反映哮喘患者的嗜酸性气道炎症及预测患者对吸入糖皮质激素（Inhaled corticosteroids,ICS）的治疗反应。课题组根据ICS治疗后Fe NO水平对第一部分收集的患儿进行分组,通过RNA-seq技术获得两组患儿外周血嗜酸性粒细胞上的差异表达基因。对RNA-seq结果进行二次生物信息学分析发现,两组患儿差异基因变化最明显的基因为细丝蛋白A（Filamin A,FLNA）,其在气道炎症持续组较气道炎症缓解组表达降低。而目前FLNA在哮喘发病或对ICS治疗反应中的作用暂无研究。目的:初步探索FLNA在过敏性哮喘及对ICS治疗反应中的作用。方法:用Cytoscape对RNA-seq结果进行二次分析以获得差异表达基因。选取差异表达变化最大的基因FLNA在第一部分收集的过敏性哮喘患儿PBMC上初步验证RNA-seq的结果。分析FLNA与其他临床指标、实验室指标及差异表达基因的相关性。同时用HDM构建哮喘小鼠模型,比较其与对照小鼠肺组织中FLNA的表达变化。结果:FLNA在ICS治疗后过敏性哮喘患儿PBMC上的表达情况与RNA-seq结果一致,其在气道炎症持续组较气道炎症缓解组表达降低,结果有统计学差异（p=0.0449）。在与其他临床指标、实验室指标及差异表达基因的相关性分析中发现,FLNA与FEV1%呈正相关,结果有统计学差异（r=0.499,p=0.03）;与ITGB4表达呈负相关,结果有统计学差异（r=0.417,p=0.043）;与ITGB7表达呈负相关,结果有统计学差异（r=0.488,p=0.015）。在小鼠肺组织中FLNA在哮喘组表达较对照组低（p=0.0004）,ITGB7在哮喘组表达较对照组高（p=0.0105）,ITGB4在两组间无差异。FLNA与ITGB7呈极强的负相关,结果有统计学差异（r=0.845,p=0.0082）,与ITGB4呈强正相关,结果无统计学差异（r=0.608,p=0.110）。结论:FLNA可能通过作用于ITGB7参与了过敏性哮喘患儿的气道炎症及对ICS的治疗反应。第二节血清IgE异常升高过敏性哮喘患儿外显子测序分析研究背景:高IgE综合征是一种罕见的原发性免疫缺陷病,该病患者血清IgE显著升高,通常超过2000Ku/L。这类病人在明确诊断前也可能仅表现为哮喘、湿疹等特应性症状。明确诊断需通过基因筛查,而基因筛查目前费用仍比较昂贵。我们在第一部分收集的患儿中发现有少数患儿其血清总IgE>2000Ku/L,那这部分哮喘患儿是否需要考虑高IgE综合征,并完善基因检查,目前对该问题尚无相关研究。目的:明确在过敏性哮喘患儿中发现异常升高的血清IgE是否需要常规完善高IgE综合征的相关基因筛查。方法:筛选出2018年8月至2019年12月数据库中血清t IgE>2000Ku/L的过敏性哮喘患儿。分析上述患儿临床资料,并将患儿入组时储存的全血送外显子测序。从OMIM数据库及文献中筛选出与高IgE综合征相关的突变基因并在外显子测序结果中查询是否存在该基因突变。对存在高IgE综合征突变基因的病例用一代测序的方法验证外显子测序的结果。结果:2018年8月至2019年12月数据库中血清t IgE>2000Ku/L的过敏性哮喘患儿共7例。其中4例存在高IgE综合征相关基因的杂合突变,3例无已报道或数据库收录的高IgE综合征的突变基因。对4例患儿行一代测序未检出外显子测序提示的突变。结论:对血清IgE异常升高的过敏性哮喘儿童,在无其他高IgE综合征相关的临床表现时可不用常规行基因筛查。