蓝莓砧穗嫁接体形成的生理与分子机制

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蓝莓对种植的土壤环境要求非常苛刻,容易受旱涝等水分胁迫。蓝莓育苗是通过组织培养建立无性系进行的,蓝莓组培苗细弱,培养周期长,炼苗和瓶外生根过程繁琐,生成的不定根根系抗性差。以上诸多因素限制了蓝莓的种植范围,严重影响了蓝莓产业的进一步发展。因此选择根系发达、对土壤pH适应范围更广的砧木进行嫁接栽培是拓宽蓝莓种植地域范围、提高蓝莓植株抗性的有效手段。本研究以蓝莓品种‘实大’和‘奥尼尔’为接穗,以‘杰兔’等10个品种为砧木,通过田间嫁接和离体嫁接方式,对不同砧穗嫁接组合进行了嫁接成活率、接穗生长量等多项生理指标的测定,在全基因组范围内鉴定了生长素响应因子基因,并研究了嫁接体形成关键基因在嫁接愈合过程中的表达特征。具体研究结果如下:(1)蓝莓不同品种砧穗组合嫁接研究结果表明,以‘杰兔’和‘顶峰’作为砧木嫁接‘实大’和‘奥尼尔’的成活率和接穗生长量显著高于其他组合;‘杰兔’和‘顶峰’是蓝莓嫁接栽培的优良备选砧木。嫁接后不同时期接穗叶片的苯丙氨酸解氨酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)等酶活力的测定结果表明,在嫁接后540 D,PPO与PAL的酶活力与‘实大’/‘杰兔’的呈显著正相关,相关系数为0.677,与以‘奥尼尔’为接穗的嫁接组合的嫁接成活率相关系数为0.738;PAL酶活性与以‘实大’为接穗的嫁接组合的嫁接成活率相关系数为0.680,与以‘奥尼尔’为接穗的嫁接组合的嫁接成活率相关系数为0.584;成活率与POD、SOD的酶活性的相关性较小。(2)离体嫁接石蜡切片观察结果表明,自体嫁接较异体嫁接亲和性更好,‘奥尼尔/夏普蓝’嫁接组合的亲和性比‘奥尼尔/杰兔’嫁接组合更好;嫁接后21 D自体嫁接组合嫁接口开始出现愈伤组织,嫁接后28 D自体嫁接嫁接口处愈伤组织明显增多,异体嫁接嫁接口有少量愈伤组织;嫁接口处无维管束连通。(3)本研究在蓝莓中鉴定得到了70个VcARF家族成员。鉴定到的VcARF可以在系统进化树中根据拟南芥中AtARF的分组特征进行相似划分,但结合序列进化、基因结构和保守结构域等分析发现蓝莓VcARF中对应的组较之拟南芥AtARF成员有其独特性。(4)利用qRT-PCR技术分析了嫁接体形成关键基因的相对表达量,发现嫁接成活率与PPO、PAL基因相关;嫁接过程中砧穗AUX/LAX、ARF基因表达量较少,推测嫁接后期成活率下降与砧穗中与生长素运输、响应因子有关的基因达量过少有关。
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