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目的:通过GC-MS检测金桔精油化学成分及含量;通过单次给药毒性试验检测金桔精油的潜在急性毒性作用;通过雌小鼠胚胎-胎仔发育试验和雄小鼠抗生育试验检测金桔精油的潜在生殖毒性作用。 方法:GC-MS检测条件。GC检测条件:采用DB-1ms系列安捷伦Agilent毛细管色谱柱(30m×0.25mm),膜的厚度为0.25μm,采用程序升温,范围60℃(0min)～250℃(10min),升温速率设定为3℃/min,载气为高纯氦气,柱中载气流速为1mL/min。MS检测条件:电离方式为EI离子源,电离电压70eV,进样口温度:230℃,分流比:150∶1,传输线温度:280℃,质量扫描范围:40-350amu。 急性毒性试验,140只SPF级昆明小鼠随机分为1个溶媒对照组和6个剂量组,每组20只,雌雄各半。金桔精油剂量组参照预试验100％致死剂量和0％致死剂量,按组间公比0.758设定为10mL·kg-1、7.60mL·kg-1、5.70mL·kg-1、4.40mL·kg-1、3.30mL·kg-1和2.50mL·kg-1,金桔精油剂量组给予不同浓度的金桔精油药液,溶媒对照组给予橄榄油,单次给药。记录急性中毒反应、强度和死亡情况。 胚胎-胎仔发育试验,96只孕小鼠随机分为1个溶媒对照组和3个剂量组,每组24只。金桔精油剂量设定为2.40mL·kg-1、1.20mL·kg-1和0.60mL·kg-1,金桔精油剂量组给予不同浓度的金桔精油药液,溶媒对照组给予橄榄油,从受精期到硬腭闭合期给药(孕鼠妊娠0～18天)。记录指标如下:孕鼠体重,成功孕鼠数,活胎数(率),死胎数(率),吸收胎数(率),性别比例,着床数,黄体数,子宫连胎仔重,胎盘重,胎仔重,胎仔体长,胎仔尾长,外观检查胎仔畸形数(率),内脏检查胎仔畸形数(率)。 抗生育试验,80雄鼠随机分为1个溶媒对照组和3个剂量组,每组24只。金桔精油剂量设定为2.40mL·kg-1、1.20mL·kg-1和0.60mL·kg-1,金桔精油剂量组给予不同浓度的金桔精油药液,溶媒对照组给予橄榄油。给药期,雄鼠给药3天后与雌鼠按10∶10合笼21天,每组2笼,雄鼠继续给药21天。恢复期,存活雄鼠休息7天后,与雌鼠按5∶10合笼21天。记录指标如下:一般临床症状,雄鼠体重,阴栓出现数(率),成功孕鼠数(率),活胎数(率),死胎数(率),吸收胎数(率),睾丸、附睾重量及系数,精子活力,精子活率,精子畸形率,SOD、MDA、NO、T水平和病理学检查。 结果:GC-MS检测,根据分析软件对数据的分析,金桔精油化学成分主要有7种,分别为α-蒎烯0.46％、β-水芹烯0.11％、β-月桂烯2.34％、D-柠檬烯95.62％、乙酸香叶酯0.10％、β-古巴烯0.67％、γ-榄香烯0.13％,7种化学成分相对百分含量占总精油量的99.43％。 急性毒性试验结果表明,金桔精油药后6小时主要的临床症状有安静怠动、共济失调、多尿、跳跃、忙碌、俯卧、翻正反射消失等,死亡时间集中在药后12h～29h。雌性小鼠LD50为6.24mL·kg-1,95％的可信限为5.39～7.33mL·kg-1;雄性小鼠LD50为5.73mL·kg-1,95％的可信限为4.91～6.79mL·kg-1。雌雄合并统计LD50为5.98mL·kg-1,95％的可信限为5.40～6.67mL·kg-1。可能涉及的毒性靶器官有肝、脾、胃肠道、雄性生殖系统。 胚胎-胎仔发育试验,金桔精油对指标如孕鼠体重,成功孕鼠数,活胎数(率),死胎数(率),吸收胎数(率),性别比例,着床数,黄体数,子宫连胎仔重,外观检查胎仔畸形数(率),内脏检查胎仔畸形数(率)等均未见明显影响(P＞0.05)。低、中、高剂量组胎仔重均小于溶媒对照组(P＜0.05),高剂量组胎盘重,胎仔体长和胎仔尾长均小于溶媒对照组(P＜0.05)。 抗生育试验,给药期,金桔精油对观察指标精子畸形率、每窝胎仔数、活胎率、死胎率、吸收胎率和SOD水平等均未见明显影响,但可降低雄鼠体重,阴栓出现率,成功孕鼠数(率),睾丸、附睾重量及系数,精子活力,精子活率,MDA、NO、T水平(P＜0.05),并睾丸出现一定程度的病理损伤。恢复期,各项指标未见显著性改变(P＞0.05),睾丸病理检查也未发现明显的损伤。 结论:首次分离得D-柠檬烯含量超95％的金桔精油,按世界卫生组织(WHO)的标准得出金桔精油的毒性分级为低毒。金桔精油能降低胎盘重、胎仔重、胎仔体长和胎仔尾长,故认为给孕鼠妊娠期给药可能会导致胎仔发育迟缓。金桔精油2.40mL·kg-1剂量会导致雄性小鼠不育,怀孕率为0,但休息28天后雄性小鼠能恢复生育能力。