鹦鹉热嗜衣原体包涵体膜蛋白CPSIT_0846抗感染免疫保护作用

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[目的]研究鹦鹉热嗜衣原体(Chlamydophila psittaci,Cps)包涵体膜蛋白(Inclusion membrane proteins,Incs)CPSIT0846的抗感染保护作用,为研制新型、有效和特异的Cps亚单位疫苗奠定基础。[方法]:将Cps 6BC经鼻感染BALB/c小鼠,设置5×104、5×105、5×106IFU三个剂量组,建立小鼠呼吸道感染模型。将CPSIT0846蛋白编码基因,经原核表达、HIS树脂纯化后获得重组蛋白。将CPSIT0846重组蛋白经腹腔注射途径免疫小鼠,末次免疫后15d,ELISA法检测免疫小鼠血清中特异性Ig A、Ig G及Ig G亚类;检测小鼠脾细胞培养上清中的IFN-γ、IL-6等细胞因子产生水平;并经呼吸道感染Cps 6BC,比较免疫组与非免疫组小鼠发病情况、存活率及肺组织病变程度,评价CPSIT0846的免疫保护作用。[结果]1.5×104、5×105、5×106IFU Cps 6BC经呼吸道感染BALB/c小鼠,小鼠出现不同程度的临床症状及脏器器官的病理改变,并呈明显的剂量依赖关系。根据临床症状、存活率及组织病变程度等指标,确定5×105 IFU为最佳感染剂量。2.将重组蛋白经腹腔注射途径免疫三次后,小鼠血清中产生高效价的特异性Ig G与Ig A抗体,其中总Ig G效价为1:48000,Ig G1为1:10400,Ig G2a为1:3000,Ig G2b 1:16000,Ig G31:10400,Ig A为1:400,均明显高于对照组(P<0.01)。3.检测各组小鼠脾细胞上清中细胞因子,结果显示,在脾细胞上清中检测到了高浓度的IFN-γ和IL-6,CPSIT0846免疫组的IFN-γ含量为544.97±80.93 pg/m L,PBS组25.86±12.54 pg/m L、卵清蛋白组32.29±12.77pg/m L,CPSIT0846组IFN-γ水平与PBS组和卵清蛋白组比较差异有统计学意义(P<0.01);免疫组IL-6含量334.25±34.47pg/m L,PBS组和卵清蛋白组含量分别为27.07±7.55 pg/m L和30.20±7.17 pg/m L,CPSIT0846组IL-6含量明显高于对照组(P<0.01)。CPSIT0846免疫组的脾淋巴细胞刺激指数(SI)为2.27,明显高于PBS组和卵清蛋白组刺激指数(P<0.01)。4.CPSIT0846蛋白免疫组小鼠经Cps呼吸道感染10d后,肺部组织病理改变较轻,而对照组没有明显保护作用。[结论]1.建立了Cps 6BC标准株呼吸道感染BALB/c小鼠的动物模型。2.CPSIT0846蛋白可使免疫小鼠产生特异性体液免疫应答和细胞免疫应答,对小鼠抗感染Cps感染具有较好的免疫保护效果。
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