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目的:骨包虫病是细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)感染导致的囊型包虫病的特殊类型之一,Eg在骨组织内寄生会影响局部骨稳态,进而导致患者发生病理性骨折。骨骼组织的完整性是通过维持进行骨形成的成骨细胞(Osteoblast,OB)和进行骨吸收的破骨细胞(Osteoclast,OC)之间的平衡来保持的,OC是人体唯一负责骨吸收的细胞,然而,目前尚未见报道Eg寄生后是如何破坏骨组织的相关文献。骨包虫病的临床表现隐匿,侵袭方式“类癌性”,目前尚无令人满意的手段用来治疗绝大多数的中晚期骨包虫病患者。放射治疗是肿瘤治疗的重要手段之一,被报道能够杀伤Eg,但很少有文献报道放射治疗在骨包虫病中的作用及其机制。本研究的主要目的:(1)使用RAW264.7细胞作为OC前体细胞在体外环境中探究Eg原头节(protoscolex,PSC)对RAW264.7细胞及其向OC分化的影响;(2)建立大鼠股骨Eg PSC感染模型,在体内环境中探究Eg PSC能否影响OC分化及其影响机制;(3)通过体外和体内实验评估X线对Eg PSC的杀伤作用,以及放疗对大鼠骨包虫病的治疗效果及其机制。方法:(1)RAW264.7细胞与PSC共培养,通过细胞增殖活性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和划痕实验评估PSC对RAW264.7细胞活力及迁移能力的影响。在共培养模型的基础上诱导RAW264.7细胞分化为OC,在诱导第7天,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色观察PSC对RAW264.7细胞破骨分化的影响;使用q RT-PCR检测OC相关基因TRAP、NFATc1、c-Fos和OSCAR的m RNA表达水平;免疫印迹(western blot,WB)检测OC分化的关键转录因子NFATc1的蛋白表达水平。(2)通过向骨髓腔内注入PSC的方式建立SD大鼠股骨Eg感染模型,实验分为4个组:假手术组,PSC-1W组、PSC-2W组和PSC-1M组。酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定各组大鼠血清中炎症因子TNF-α和IL-1β的浓度;苏木素-伊红(Hematoxylin-Eosin,HE)染色观察各组大鼠股骨组织病理形态学变化;TRAP染色观察各组大鼠骨组织OC分化情况;使用q RT-PCR检测各组OC相关基因RANKL、NFATc1、CTSK的m RNA表达水平;通过免疫组化测定各组TNF-α、IL-1β、RANKL、NFATc1、CTSK的表达;WB检测PSC感染对RANKL/RANK/OPG信号通路的影响。(3)(1)体外培养PSC,使用0Gy、40Gy、50Gy和60Gy的6MV-X线对PSC进行单次照射,观察并计算照射后的第1天、第5天、第10天PSC的死亡率,照射后第7天、14天PSC的成囊率,q RT-PCR检测受照射后PSC相关基因Eg EPC1、Eg TPx、Eg Caspase-3的m RNA表达情况;(2)动物实验分为3组,假手术组,模型组(PSC组)和放疗干预组(PSC+RT组),HE染色观察各组大鼠股骨组织病理形态学变化;TRAP染色观察各组大鼠骨组织OC分化情况;q RT-PCR检测大鼠骨包虫病灶部位Eg相关基因Eg EPC1、Eg TPx及p53信号通路相关基因Eg p53、Eg Bax、Eg Caspase-3的m RNA表达情况。通过免疫组化测定各组CTSK、p53、Bax、Cyt c、Caspase-3的表达。结果:(1)CCK-8结果显示PSC能够增强RAW264.7细胞活力;划痕实验表明PSC能够增强RAW264.7细胞的迁移能力;TRAP染色和q RT-PCR结果表明PSC能够促进RAW264.7细胞分化为OC,并且能够促进OC相关基因的表达(P<0.05);WB结果表明PSC能够上调OC分化关键转录因子NFATc1的表达水平(P<0.01)。(2)HE染色结果表明PSC感染后骨髓腔内炎症细胞增多,ELISA结果显示PSC感染后大鼠血清促炎细胞因子IL-1β和TNF-α水平升高(P<0.05);大鼠股骨组织的TRAP染色结果表明PSC感染组OC数量增多(P<0.05);q RT-PCR结果表明PSC感染组RANKL、NFATc1及CTSK基因m RNA表达水平高于假手术组(P<0.05);免疫组化结果表明PSC感染组TNF-α、IL-1β、RANKL、NFATc1、CTSK的表达更高(P<0.05);WB结果表明PSC感染组OPG/RANKL比值明显降低(P<0.05)。(3)(1)X线照射后,PSC的死亡率明显升高(P<0.05),成囊率明显降低(P<0.05);q RT-PCR结果表明,X线照射后,Eg标志基因Eg EPC1的m RNA表达水平下降(P<0.05),抗氧化基因Eg TPx及凋亡基因Eg Caspase-3的m RNA表达水平升高(P<0.05);(2)TRAP染色结果表明,50Gy/5f的放射治疗通过杀伤Eg,降低了其促进OC分化的能力,q RT-PCR结果表明,Eg EPC1 m RNA的表达水平下降(P<0.01),Eg TPx、Eg p53、Eg Bax及Eg Caspase-3的m RNA表达水平升高(P<0.01);免疫组化结果表明,与PSC组比较,放疗干预组CTSK的表达降低,p53、Bax、Cyt c、Caspase-3的表达升高(P<0.05)。结论:(1)PSC不仅能够增强RAW264.7细胞的活力和迁移能力,还能够促进RAW264.7分化为OC。(2)PSC感染能够引起大鼠炎症反应,促进OC分化,骨包虫病破坏骨组织的机制可能与PSC感染激活RANKL/RANK/OPG信号通路有关。(3)X线能够在体外抑制和杀伤原头节,对骨包虫病灶的放射治疗能够通过抑制和杀伤寄生虫进而阻止其对骨组织的破坏作用;放射治疗发挥效用的机制可能与p53信号通路的激活有关。