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猪是与人类关系最为密切的家畜之一,与人们的日常生活息息相关。猪肉是世界上消耗量最大的肉类,猪肉产量及品质的提高与人们生活水平的改善密切相关。利用转基因技术使启动子启动外源基因在骨骼肌中特异性的表达是提高肉质的一个重要方法。猪骨骼肌α肌动蛋白(α-actin)是构成骨骼肌肌纤维细丝的主要成分,其启动子能使外源基因在骨骼肌中特异性表达。本研究分别用PCR、限制性内切酶酶切和定点突变方法构建不同表达载体,通过细胞培养和转染技术,利用双荧光素酶报告系统检测不同载体的表达情况。结果表明:1.2.0Kb-2.3Kb和0.06Kb-0.37Kb是调控猪骨骼肌型α肌动蛋白基因表达水平的重要区段。2.在0.06Kb-0.37Kb有一个CArG box位点影响该基因的转录,删除和突变该片段后,其启动活性分别是3.04Kb片段的20%和43%,显著降低(P<0.01)。研究结果可为构建猪骨骼肌特异性高效表达的载体,以指导外源基因在猪肉中特异性的表达提供参考。脂肪的沉积能力与猪肉品质有着密切的联系。苹果酸酶1(malic enzyme1,简称ME1)是机体内源性脂肪酸合成的关键酶,与生物体的脂肪酸合成效率密切相关。猪的脂肪沉积能力与ME1的表达水平有关。为了研究该基因在转录水平上的表达调控,本研究分别用PCR和定点突变等方法,克隆了猪ME1基因的5′调控区,研究了其多态性与报告基因表达量的关系,通过构建不同删除载体分析了该基因5′调控区的功能。结果表明:1.在猪ME1基因5′调控区﹣1068位点的G到A的突变产生的等位基因G有增加报告基因表达的趋势,但差异不显著。2.删除试验结果显示,该基因的5′调控区614bp-717bp有增强猪ME1基因表达的顺式元件,263bp-405bp区段有抑制猪ME1基因表达的顺式元件。综上所述,本研究对猪骨骼肌发育及脂肪沉积有密切关系的两个基因α-actin和ME1的转录调控进行了分析,分别找到了调控基因表达水平的重要元件。本研究还对ME1基因5′调控区﹣1068位点的G到A突变对基因表达的影响进行了分析。