基于亲环蛋白A的针刺抗哮喘免疫调节作用研究

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目的:  本研究基于重组和纯化的人亲环蛋白A(cyclophilin A,CyPA),对大鼠哮喘模型气道阻力、大鼠离体气管螺旋条张力及大鼠脾淋巴细胞培养上清液免疫因子的作用进行研究。为阐明针刺抗哮喘的作用机制和效应物质基础奠定扎实的研究工作基础,同时为基于针灸效应物质基础研究的靶标发现和创新药物发展提供一条可能的新途径。  方法:  1.大鼠造模后第15天颈外静脉注射卵蛋白(albumin,OVA)激发哮喘发作,激发前10min经颈外静脉分别注射1ng/kg、10ng/kg、100ng/kg和1000ng/kg的CyPA,检测哮喘大鼠气道阻力的变化情况。  2.分离大鼠气管,制成气管螺旋条,固定于离体气管条张力检测系统。平衡1h后在系统的平衡液中滴加氯化乙酰胆碱(Acetylcholine chloride,Ach)刺激气管条收缩。待其张力值稳定后再滴加不同浓度的CyPA(分别为1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml和1000ng/ml),检测气管条张力的变化情况。  3.分离大鼠脾淋巴细胞,分别与50μg/ml、10μg/ml、2μg/ml、0.4μg/ml、0.08μg/ml、0.016μg/ml、0.0032μg/ml七个不同浓度的CyPA共培养,用Bio-plex和ELISA方法检测淋巴细胞培养上清液中细胞因子和免疫球蛋白的含量。  结果:  1.CyPA1ng/kg、10ng/kg、100ng/kg和1000ng/kg四个剂量对哮喘模型大鼠气道阻力均有明显降低作用(P<0.05)。  2.CyPA1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml和1000ng/ml四个剂量对大鼠气管螺旋条张力均有明显舒张作用(P<0.05)。  3.CyPA的剂量在50μg/ml时对PWM刺激的淋巴细胞IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-10、IL-13、IFN-γ和TGF-β1分泌有明显促进作用(P<0.05);CyPA在10μg/ml时对PWM刺激的淋巴细胞IL-1β和TGF-β1的分泌有明显促进作用(P<0.05),对IL-5、IL-10和IL-13的分泌有明显抑制作用(P<0.05);CyPA在2μg/ml、0.4μg/ml、0.08μg/ml、0.016μg/ml和0.0032μg/ml时对IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-13、TNF-α和IFN-γ分泌均有明显抑制作用(P<0.05)。  4.CyPA在≥0.08μg/ml时对正常淋巴细胞主要发挥促进细胞因子分泌的作用(P<0.05),在0.016μg/ml时主要发挥抑制细胞因子分泌的作用(P<0.05),在0.0032μg/ml时有抑制IL-1β和IL-13分泌(P<0.05),促进TGF-β1和TGF-β2分泌的作用(P<0.05)。  5.CyPA的剂量在50μg/ml对PWM刺激的淋巴细胞IgG、IgA和IgM的分泌主要发挥促进作用(P<0.05),10μg/ml及以下剂量则主要发挥抑制作用(P<0.05)。CyPA对正常淋巴细胞免疫球蛋白的分泌主要发挥促进作用(P<0.05)。CyPA对PWM刺激和正常淋巴细胞培养上清液中IgE含量均没有明显影响。  结论:  1.CyPA能够明显降低哮喘大鼠气道阻力,缓解哮喘大鼠气道平滑肌张力,改善哮喘大鼠呼吸功能。  2.CyPA能影响不同状态淋巴细胞细胞因子和免疫球蛋白的分泌,调节细胞免疫和体液免疫状态。  3.针刺抗哮喘差异表达蛋白CyPA可能通过调节细胞免疫和体液免疫发挥抗哮喘作用。
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