目的和意义:本研究通过体外及体内实验,探讨STIM1（stromal interaction molecule 1）表达对鼻咽癌细胞侵袭转移行为的影响及潜在的调控机制,为寻找能够有效抵抗鼻咽癌侵袭与转移的治疗策略与方法提供新的科学依据。方法:1.将分别携带有STIM1基因干扰片段及其空载片段的慢病毒载体转染至鼻咽癌5-8F细胞株中,加入嘌呤霉素连续作用2周后挑选出稳定表达绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein,GFP）的细胞克隆。在倒置相差荧光显微镜下定期观察细胞转染效率。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-q PCR）及Western-blot方法检测STIM1的表达水平。2.在给予细胞外EGF刺激的条件下,运用Wound-healing（划痕试验）和Trans-well迁移/侵袭试验来评价鼻咽癌细胞（sh RNA-Ctrl.vs.sh RNA-STIM1）的运动迁移能力。3.在SPF环境下,经裸鼠足垫皮下注射稳定转染的鼻咽癌细胞（sh RNA-Ctrl.vs.sh RNA-STIM1）以构建裸鼠鼻咽癌细胞淋巴结转移模型。连续观察40天后,取裸鼠腹股沟淋巴结,H＆E染色寻找异型性明显的肿瘤细胞,并采用免疫组织化学实验进一步检测细胞角蛋白阳性细胞,以观察沉默STIM1表达对鼻咽癌细胞淋巴转移能力的影响。4.采用Western Blot方法检测空白对照组、sh RNA-Ctrl.组以及sh RNA-STIM1组的EGFR/p EGFR蛋白表达水平。5.将鼻咽癌细胞株5-8F（sh RNA-Ctrl.vs.sh RNA-STIM1）无血清饥饿处理24h后,替换为含EGF（50 ng/m L）的培养基培养,在显微镜下观察EGF刺激前、后的细胞形态改变。6.Western-blot及细胞免疫荧光法检测鼻咽癌细胞5-8F（sh RNA-Ctrl.vs.sh RNA-STIM1）在EGF刺激24h后E-cadherin（上皮标记物）、N-cadherin（间质标记物）的表达改变。结果:1.PCR结果显示,与空白对照组及sh RNA-Ctrl组相比,sh RNA-STIM1组STIM1 mRNA的相对表达量明显减少（P＜0.05）;同时,Western-blot结果显示,sh RNA-STIM1组STIM1蛋白的相对表达量相比对照组也明显减少（P＜0.05）。以上结果表明携带STIM1基因干扰片段的慢病毒载体能够有效地转染鼻咽癌细胞并沉默STIM1的表达。2.划痕试验结果显示,与sh RNA-Ctrl组相比,sh RNA-STIM1组24小时划痕愈合率明显降低（P＜0.05）;Trans-well迁徙/侵袭试验结果显示,与sh RNA-Ctrl组相比,sh RNA-STIM1组24小时的穿膜细胞数明显减少,表明其迁移与侵袭能力明显减弱（P＜0.05）。3.HE染色与免疫组化结果共同显示:sh RNA-Ctrl组6只裸鼠有4只发生了腹股沟淋巴结转移66.7%（4/6）,而sh RNA-STIM1组6只裸鼠均未发现腹股沟淋巴结转移（0%,0/6）,两组间差异具有统计学意义（P＜0.05）。4.Western-blot检测空白组、sh RNA-Ctrl组和sh RNA-STIM1组在EGF刺激前后均表达EGFR,且三组的表达水平无明显差异;在EGF刺激0h时,空白对照组、sh RNA-Ctrl组及sh RNA-STIM1组的p-EGFR均为低表达,EGF刺激15分钟后三组的p-EGFR表达显著增加,组间并无明显差异,表明沉默STIM1对EGFR的活化（即磷酸化）本身并无明显影响。5.EGF刺激0h时,sh RNA-Ctrl.组和sh RNA-STIM1组细胞形态规则,细胞间紧密连接,具有极性;24h时后,对照组细胞伸出触角,形态呈不规则形,细胞间连接解体、极性消失,表现出间充质细胞的特征,显示出具有更强运动迁移能力的表型;与0小时相比,sh RNA-STIM1组细胞在EGF刺激24小时后变化不明显。6.在EGF刺激0h时,Western-blot及细胞免疫荧光检测sh RNA-Ctrl及sh RNA-STIM1组的E-cadherin表达水平较高而N-cadherin表达水平很低;24h时,sh RNA-Ctrl组的E-cadherin表达均显著下调、N-cadherin表达均显著上调;而sh RNA-STIM1组的E-cadherin、N-cadherin表达较0h无明显改变。结论:1.敲减STIM1基因可降低鼻咽癌细胞株5-8F的体外侵袭转移能力。2.敲减STIM1基因可明显抑制5-8F细胞在裸鼠模型中的淋巴侵袭转移能力。3.STIM1通过操纵EGFR活化诱导的EMT进程以调控鼻咽癌细胞侵袭转移功能。