萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶的抗氧化功能研究

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已证实磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(Phospholipid Hydroperoxide Glutathione Peroxidase ,PHGPx)可以通过降低磷脂过氧化程度来防止膜过氧化损伤。自1982年PHGPx被作为一种过氧化抑制蛋白从猪肝脏中提取出以来,PHGPx的酶学功能和催化性质得到了广泛的研究。目前的发现已经证明,PHGPx可以作为氧化胁迫下的细胞保护剂。特别的是,在一些细胞模型中PHGPx可以在针对磷脂过氧化时扮演独特的作用。但是到目前为止,外源性的PHGPx蛋白对氧化胁迫下细胞体系的保护作用还未见报道。本文利用生物和化学的实验方法,建立了氧化胁迫的细胞模型;选取在原核细胞中高效表达、活性高、易纯化的萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(RsPHGPx),对其抗氧化作用进行了研究。通过细胞形态学检验、细胞活力测定以及细胞内脂质过氧化程度检测,研究了RsPHGPx对于细胞生长状况的影响。实验结果显示,在氧化胁迫的条件下,RsPHGPx预处理可以有效地维持正常的细胞形态、保持较高的细胞活力并且降低丙二醛(MDA)水平。此外,通过与RsPHGPx的失活突变体mRsPHGPx对照,证实RsPHGPx对细胞的这一保护作用是由其催化活性决定的。通过检测细胞内活性氧水平和凋亡情况,证明RsPHGPx的加入可以有效降低细胞内的活性氧水平,并且抑制氧化胁迫情况下的细胞凋亡。这一结果证实了RsPHGPx的处理可以通过清除活性氧的方式保护细胞。此外,本研究还进行了RsPHGPx与谷胱甘肽联合作用保护细胞的实验。结果证明,RsPHGPx的加入可显著提高谷胱甘肽对氧化胁迫下细胞的保护作用,从而高效地清除细胞内的活性氧。这一实验结果为复合型抗氧化制剂的研究提供了参考。
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