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目的: 结肠癌(Colon cancer)是消化系统常见的恶性肿瘤,发病率和死亡率分别位居中国恶性肿瘤第三位和第五位。结肠癌的发生是一个长期演变的过程,多种癌基因的激活及抑癌基因的失活参与其中。结肠癌的疗效及预后与其首次诊断的临床分期关系密切,早期结肠癌的5年生存率在90%以上,而有远处转移的进展期结肠癌5年生存率仅有12%。早期诊断有赖于敏感性和特异性高、依从性好的检查方法。但目前临床应用便潜血及粪便DNA检查虽简便、无创,但敏感性及特异性低。结肠镜是目前诊断结肠癌最好的检查方法,但检查前需做肠道准备,检查中有腹痛、腹胀等明显不适感还可能出现穿孔及出血等并发症,部分患者拒绝该检查,依从性较差。探寻有临床应用潜力的结肠癌诊断检测指标,是目前临床有待解决的问题。 大量研究结果证明,结肠癌组织及癌旁黏膜的基因表达谱(mRNA)是有差异的,这些异常表达的基因可作为结肠癌诊断的检查指标。Nancy等报道,不仅结肠癌组织中存在异常表达基因,包括直肠在内的其它部位肠粘膜也出现了相关基因mRNA的异常表达,直肠粘膜上皮异常表达的mRNA可作为诊断结肠癌的分子靶点。但mRNA性质不稳,极易降解,对临床标本的保存条件要求高,限制了其临床应用。微小RNA(microRNA/miRNA)是一类非编码小RNA,能在转录后水平调节基因表达,与mRNA相比性质稳定,不容易降解,可通过调节肿瘤细胞的增殖和侵袭等过程,发挥癌基因或抑癌基因的作用。本课题组在Pubmed数据库中检索结肠癌microRNA表达谱系的研究结果,并从中筛选出异常高表达的miRNA-182-5p作为研究对象。本研究通过对比miRNA-182-5p在结肠癌患者石蜡包埋组织及新鲜组织的表达水平验证了microRNA不易降解的特性;通过检测miRNA-182-5p在结肠癌组织、癌旁黏膜及直肠黏膜的表达,证实与健康受试者相比上述3组取自结肠癌患者的黏膜组织中均有miRNA-182-5p的异常高表达,从而为临床上利用直肠黏膜做结肠癌筛查提供了理论依据。 方法: 1、收集2015年12月-2017年1月在承德医学院附属医院病理科诊断为结肠癌患者的术后石蜡包埋标本共30例;2017年1月-2017年12月在承德医学院附属医院内镜室经结肠镜获取的结肠癌患者新鲜大肠黏膜标本共42例及体检的健康志愿者直肠粘膜(距肛门5cm)共31例。 2、应用RT-qPCR方法检测miRNA-182-5p在结肠癌术后石蜡病理标本和结肠镜下活检新鲜结肠癌组织、癌旁黏膜、直肠黏膜及健康对照组直肠黏膜标本中的表达量。 3、应用SPSS23.0软件进行数据处理,对实时荧光定量PCR检测结果进行统计分析,正态分布的计量数据以(x±s)表示,组间比较采用t检验,所得结果均以P<0.05为差异有统计学意义。 结果: 1、石蜡包埋标本中,miRNA-182-5p在结肠癌组织表达量(38.62±5.71)与癌旁黏膜(24.29±6.55)相比明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。 2、石蜡包埋结肠癌组织中miR-182-5p表达量(38.62±5.71)与新鲜结肠癌组织表达量(36.34±6.15)相比无明显差距,差异无统计学意义(P>0.05)。 3、在结肠癌患者新鲜肠黏膜标本中,miRNA-182-5p在直肠粘膜(24.03±5.56)及癌旁粘膜中的表达(25.95±5.23)均明显低于结肠癌组织(36.34±6.15),但均高于健康对照组(8.13±2.75),差异具有统计学意义(P<0.05)。 结论: miRNA-182-5p不但在结肠癌组织中异常升高,其在结肠癌患者直肠粘膜的表达量也明显高于健康受试者,并且其性质稳定,可经固定及包埋处理而不降解,使其成为结肠癌诊断中有潜在应用价值的分子标志物。