研究目的：
　　1.研究毛滴虫分子生物学特性，建立肺部毛滴虫巢氏PCR检测方法，优化该方法的反应条件，并进一步评估其特异性、敏感性、重复性，为临床肺部毛滴虫检测及其引起肺炎的临床诊断提供实验基础。
　　2.通过使用已建立好的巢氏PCR方法检测分离自2017年-2018年间温州医科大学附属第一医院临床送检肺泡灌洗液标本中的肺部毛滴虫，进一步对巢式PCR方法进行评估并运用系统发育分析确定滴虫类型，为临床治疗提供依据。
　　研究方法：
　　1.通过NCBI下载80种毛滴虫的18S rRNA基因序列，然后通过序列比对鉴定最保守的基因区域，并以此序列为模板设计引物，初步确定巢氏PCR检测方法的反应体系。
　　2.分别以人五毛滴虫、口腔滴虫、阴道毛滴虫、蓝氏贾第鞭毛虫、弓形虫、白色念珠菌的DNA作为模板进行巢氏PCR，评估其特异性；显微镜计数阴道毛滴虫个数并对其进行梯度稀释，分别提取其DNA并作为模板进行巢氏PCR检测，评价其敏感性。阴道毛滴虫DNA作为阳性对照，以人基因组DNA为阴性对照。
　　3.收集2017年-2018年间温州医科大学附属第一医院临床送检的肺泡灌洗液标本，运用建立好的巢氏PCR检测方法检测滴虫，并与湿片镜检法进行比较。
　　4.对所有阳性标本进行系统发育分析，确定肺部毛滴虫类型。
　　研究结果：
　　1.以阴道毛滴虫DNA为模板进行巢氏PCR，阳性产物通过琼脂糖凝胶电泳，可观察到约380bp大小的独立条带。
　　2.巢式PCR方法能特异性扩增阴道毛滴虫、人五毛滴虫、口腔滴虫目的片段，而对蓝氏贾第鞭毛虫、弓形虫、白色念珠菌和人基因组DNA无特异性扩增；敏感性实验结果表明：巢氏PCR检测方法滴虫最低检出限为102个/ml。
　　3.115例肺泡灌洗液标本中，巢氏PCR共检出10例阳性标本（10/115）；镜检法未检出阳性标本（0/115）。
　　4.对10例阳性标本PCR产物进行测序，通过对这些序列进行系统发育分析，得出2例为四毛滴虫（2/10），其余8例为口腔滴虫（8/10）。
　　研究结论：
　　1.本研究所构建的巢氏PCR检测方法是用于检测肺泡灌洗液毛滴虫的一种灵敏且特异的方法。
　　2.巢式PCR（10/115）相比于湿片镜检法（0/115）在肺泡灌洗液中检测毛滴虫灵敏度更高（P＜0.01）。
　　3.口腔滴虫和四毛滴虫被证明能在肺泡灌洗液中检出，提示临床需要重视肺部毛滴虫感染，并改进肺部感染病原体检测方案。